[发明专利]辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食用菌种源的生产方法，尤其涉及一种辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法。属于食用菌药用菌遗传育种领域。

背景技术

冬虫夏草【Cordyceps sinensis】是我国传统的名贵药材，分布于西藏、青海、四川、甘肃、云南等地，具有特殊的药理作用和治疗功效。也是药食调补佳品。其中虫草素是最独特而重要的药物成分。

近年来由于人类活动范围的扩大，生态环境的恶化，导致野生冬虫夏草持续减少，价格也持续飙升。到2010年优质虫草已经销售到16万元/公斤(干)。为解决冬虫夏草资源紧缺问题，人们很早就开始关注蛹虫草，从1986年起，人们把野生蛹虫草采集回来，通过组织分离获得菌种，20多年里，蛹虫草栽培获得重大技术突破。目前它已经成为冬虫夏草的最佳替代品。全世界已知虫草类有350余种，我国目前有62种，但最为昂贵的只有冬虫夏草和蛹虫草。

北虫草即蛹虫草【Cordycepsmilitaris(L.)Link】、又称之北冬虫夏草，它是虫草属中两个模式种之一。2007年我国正式将北虫草列为新资源食品。它被认为是目前唯一能替代冬虫夏草的虫草属真菌。北虫草在世界上广泛分布，它能够寄生在多种鳞翅目昆虫的幼虫及其蛹体上，在我国各地分布较广，主要分布剥蚀丘陵地带、海拔50-400米之间、气候属于北温带、半湿润大陆性气候、每年只有林区在郁闭、避风的地段才能有北虫草集中发生，而传统的冬虫夏草主产于我国青海、云贵高原的横断山区及祁连山等海拔4500-5000米以上的高原灌丛或草甸地带、寄生在冻土层中的蝙蝠蛾幼虫体上，遗憾的是对于这种名贵中药材至今未能实现有效的子实体人工培养及规模化生产，但是国内外对已经成为诱发虫草子实体的种类研究认为，北虫草食用和药用价值可与传统的冬虫夏草媲美，它不仅在药效成分种类上与传统冬虫夏草相近外，而且是在已报道的350余种虫草菌中唯一能大量形成虫草素的种，因此它与传统冬虫夏草一样，能滋补人体，而且能有效地抑制肿瘤和病毒，并具有多种药理功能，是传统冬虫夏草的最理想代用品，但野生的北冬虫夏草与传统的冬虫夏草一样，在自然界中稀少，价格昂贵，因此，人工培育具有自然形态的北冬虫夏草子实体，意义重大，经济效益显著！

虫草素是虫草属药用真菌中独有的药物成分，是一种核苷类抗生素，具有较好的抗病毒功能；能抑制枯草杆菌，鸟结核杆菌和艾氏腹水癌细胞，并对KB细胞培养和Hep#2细胞有毒性作用，可影响mRNA的形成以至蛋白质的合成，这一机制与虫草素抗肿瘤有关，1997年美国已将虫草素用于一期临床试验，治疗急性前B和前T淋巴细胞白血病患者；同时，虫草素还表现出极强的抗真菌，抗HIV-I型病毒和选择性抑制梭菌属细菌活性。经检测人工栽培的北虫草富含虫草素，其含量高于冬虫夏草。

目前北虫草的人工栽培技术已经相当成熟，但在如何提高北虫草内在品质方面尚有大量工作需要去做，其中如何提高北虫草内虫草素含量就是一个重要课题。资料显示，目前科技工作者在提高虫草素方面主要是通过向培养基中添加一定数量的蛋白源，但这种做法提高幅度有限，从2008年起，我们主要通过培育北虫草新品种来提高虫草素含量，具体做法就是对现有虫草种源进行辐射育种，再通过液相色谱检测法筛选虫草素产率高的新菌株。本专利所提及的高产虫草素北虫草新菌株ycc Gy 1016的生产方法就是在上述背景下选育而成。批量多次重复的栽培结果表明，在相同栽培培养基和管理条件下，采用ycc Gy 1016和ycc-01两个不同品种进行栽培，所获得的虫草干品中虫草素含量差异明显，与种源本身产生虫草素能力成正相关。

发明内容：

本发明为了解决目前为提高北虫草的虫草素含量，所采用的通过向培养基中添加一定数量的蛋白源其提高幅度有限，效果不理想的技术问题，提供一种辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法，通过低剂量铯137放射性元素辐射后筛选获得，定名为：ycc Gy 1016；具体生产方法是通过下述步骤实现的：

1)选择目前生产中广泛使用的北虫草品种ycc-01作为辐射育种的出发菌株；

2)ycc-01培养基配方：葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、复合维生素100毫克及蒸馏水1000毫升，按常规方法生产液体种源；

3)按常规方法制备加富PDA培养基，取直径10厘米培养皿同步高压灭菌，倒平板、冷却后涂布稀释1000-3000倍的含有分生孢子的液体种源菌液0.1-0.5毫升，均匀涂布于平板上，在18-25℃避光定植培养24-36小时，然后转入辐射处理；