[发明专利]一种乙型肝炎病毒表面抗原的检测试剂及检测方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种乙型肝炎表面抗原HBsAg的检测试剂及其检测HBsAg的方法，特别涉及一种水溶性A₃B型金属卟啉标记乙型肝炎表面抗体HBsAb作为HBsAg的检测试剂及其检测HBsAg的方法。

(二)背景技术

乙型肝炎(乙肝)病毒感染是一个全球性的问题，并且严重威胁到人类的健康，乙肝病毒是引起急慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌的重要致病因素。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)一直是乙肝病毒感染的检测中最为重要的标记物，是乙肝的早期诊断指标之一。目前国内最常用的HBsAg测定方法有胶体金免疫层析法(GICA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)：前者具有快速方便的优点，更适用于医疗卫生单位和血站、出入境检验检疫部门用于HBsAg的现场初筛，以节约时间和降低成本，但不适合日常门诊住院患者的检测，更不适合血站实验室内HBsAg的检查，因为其在低浓度时常发生漏检；后者测定HBsAg常用的是双抗体夹心法，该法分为一步法和二分法：一步法简单、方便、快速，灵敏度较高，特异性较好，但在临床实践中常会出现一些假阳性或假阴性结果，以及时阴时阳现象，给诊断带来严重的影响；两步法虽然灵敏度没有一步法高，检测速度也没一步法快，但是其反应却更为稳定，重复性也更好，两步法更适用于医院住院、门诊患者和献血员的血清HBsAg检测，是目前医院和血站实验室的最佳选择。ELISA试剂具有灵敏度高、成本低、可大规模操作等优点，是目前免疫市场的主流，但其高分子量所带来的非特异吸附本底信号会降低其特异检测的灵敏度，同时还具有标记率低、稳定性差、与生物分子耦合方法复杂、纯化困难等缺点。

卟啉类化合物是生物体系中广泛存在的一类多种酶活性中心，其在生物体系中具有重要的生物功能，如氧化还原、电子传递，光合成及烃氧化等。卟啉类化合物对光具有高稳定性，对可见光的高消光系数及独特的激发态特性，使它们成为光电化学应用中的首选材料。

1982年，Ikarlyama等以氯化血红素代替辣根过氧化酶(HR)，用碳二亚胺法将其标记在人体血清白蛋白(HSA)上，结合固体酶免疫分析技术，对HSA的化学发光免疫测试进行了初步探讨。他们这一开创性的研究，为金属卟啉在酶免疫分析中的应用奠定了基础。1984年，Hara等将铁卟啉配合物标记于HSA抗体上用于检测HSA，并将这一体系应用于分析化学中，该体系是构建在流动注射分析设备上的，不利于应用到医学诊断及环境监测等。1992年，Adam等对铁卟啉和锰卟啉的催化机理进行的研究，并与辣根过氧化酶的催化发光效应进行了比较。1993年和1994年，Motsenbocker等用光敏剂和金属卟啉标记抗体进行免疫检测。在国内，慈云祥、孙淑声等课题组对于金属卟啉催化剂替代辣根过氧化酶催化化学发光反应也进行了一些探索。目前，没有将金属卟啉配合物作为标记物检测HBsAg的研究及报道。

本发明结合ELISA技术，首次提出采用水溶性A3B型金属卟啉配合物作为标记物构建化学发光免疫检测HBsAg的方法，该方法集合了化学发光免疫检测及酶标方法的优点，克服了酶标方法高非特异吸附本底信号及低标记率的缺陷，简便、快速，易实现自动化，不仅具有免疫反应的特异性、化学发光反应的高灵敏性，而且还具有化学标记物的稳定性。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种水溶性A₃B型金属卟啉标记乙型肝炎表面抗体HBsAb检测HBsAg的方法，该方法集合了化学发光免疫检测及酶标方法的优点，克服了酶标方法高非特异吸附本底信号及低标记率的缺陷。

本发明采用的技术方案是：

一种乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg的检测试剂，所述的检测试剂是以水溶性A₃B型金属卟啉标记乙肝病毒表面抗体HBsAb得到的的金属卟啉标记HBsAb，所述的水溶性A₃B型金属卟啉如式(I)所示：

式(I)中R为n为0～6的自然数。

所述的式(I)中n优选为0。