[发明专利]检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，该试剂盒内设置有包被西尼罗病毒样颗粒的可拆96孔酶标板，酶结合物工作液，cutoff血清，阳性对照，阴性对照，样品稀释液，洗涤液，TMB底物溶液和终止液。

2.  如权利要求1所述的检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述西尼罗病毒样颗粒是通过基因重组技术，以真核细胞表达系统共表达病毒衣壳的蛋白成分，通过病毒形态学和分子免疫学鉴定，蔗糖梯度离心结合超速离心纯化，获得西尼罗病毒的VLPs。

3.  如权利要求1所述的检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为的 0.01M、pH7.4的磷酸缓冲液；所述洗涤液为含0.1%吐温-20的0.1M、pH7.4的磷酸缓冲液，所述终止液为2M硫酸溶液。

4.利用上述试剂盒间接ELISA诊断人西尼罗病毒的方法，其特征在于，该方法具体为：

1）  被检测血清、cutoff血清、标准阳性血清和标准阴性血清都用血清稀释液作1:100稀释后，按酶标板加样模式每孔加入100ul，37度放置1h；

2）  倒尽板孔中液体，加满洗涤液，静置3min，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽；

3） 每反应孔加入辣根过氧化物酶羊抗人IgG使用液，每孔100ul，37度放置0.5h，倒尽板孔中液体，加满洗涤液，静置3min，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽；

4）  每个显色孔加显色底物100ul，室温放置15min；

5）  每个显色孔加终止液50ul终止反应；

6）  用酶标仪测定OD值：在450nm波长下测定各孔吸光光。

5.  如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法检测样本的判定标准为：每板、或同一板的孔条或孔检测时，必须包括cut-off校准样和两个对照样，判定结果以待测样本OD₄₅₀值与cutoff OD₄₅₀值比值P/C，大于等于1.5判定为阳性，小于等于1.3判定为阴性，介于1.3-1.5之间为可疑，须重检，重检时P/C值大于等于1.5判定为阳性，小于等于1.3判定为阴性。