[发明专利]扇贝抗氧化肽纳米脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于海洋生物化妆品领域，特别是涉及一种扇贝抗氧化肽纳米脂质体及其制备方法。

背景技术

脂质体自1962年发现以来，以其独特的结构和功能在化妆品、医药领域逐渐推广。在化妆品领域中，脂质体作为活性成分的载体，利用磷脂双层膜与皮肤细胞的亲和性，可以将一些有效营养物质传递至皮肤深层，从而促进了吸收，减少了刺激性。继1986年Dior首次开发了商品名为Capture的脂质体化妆品以来，国外对脂质体在皮肤学和化妆品学中的应用进行了大量的研究：将保湿剂、维生素制成脂质体，可以利用其缓释特点，延长功效时间；将防晒剂制成脂质体，可以增加渗透性，还具有防水效果。美国开发的GAI脂质体产品，贮藏12个月后仍然保持有90％的标准活性，85％的脂质体保持稳定。在日本，神经酰胺及其脂质体技术的研究和应用成果申请了大批的专利。在国内，北京同仁堂公司引进德国专利技术，成功制备了质量稳定的纳米脂质体化妆品，为脂质体的大规模市场化迈出了坚实的一步。

抗氧化肽在护肤品中的应用也被认为是最有开拓希望的新领域，抗氧化肽的共同特性是具有俘获各种反应所产生的活性高的自由基，使之成为惰性化合物。因此，抗氧化肽应用于体外可抵抗紫外线对皮肤造成的老损，从而保护其结构功能；尤其作为特效添加剂应用于各种高档日化产品中而风靡全球，堪称发展最快、效益最好的新兴产业，受到国内外研究机构、制造厂商的重视。前期研究表明扇贝抗氧化肽是海洋活性多肽的一种，不仅具有清除羟自由基和超氧阴离子的能力，还能延缓自然衰老动物皮肤老化。应用研究还表明，该扇贝抗氧化肽能对抗紫外线和60Co-「射线对淋巴细胞的辐射损伤，有免疫增强作用等，美容防晒效果显著。由于多肽对皮肤的修复和美白效果需要深入皮肤深层，才能被真皮层吸收，对皮肤黑色素形成的关键酶才能起到抑制性作用。因此，选择合理有效的方法，对多肽进行保护，使其达到作用的关键部位，成为最大限度的发挥其活性的关键。脂质体的发现，为扇贝抗氧化肽的深入开发提供了思路。如果利用脂质体技术将多肽包裹起来，能够渗入皮肤表层达到相应作用部位并维持一定时间，就能最大限度的发挥其活性，提高其利用率。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术有在不足，提供一种脂质体形态均一，粒径200nm以下，包封率高，渗透率低，符合化妆品的透皮吸收要求的扇贝抗氧化肽纳米脂质体(或称PCF纳米脂质体)及其制备方法。

本发明提供的扇贝抗氧化肽的纳米脂质体，其特征在于由下列pH梯度法制备扇贝抗氧化肽纳米脂质体为球形单室脂质体，形态均一，包封率高达97.29％，粒子直径平均分布在200nm以下，总含量在85％以上，平均Zeta电位为-21.3mV，稳定性较强，包封率在4℃下一个月内基本保持稳定；

所述pH梯度法制备扇贝抗氧化肽纳米脂质体，包括下列步骤：

①空白脂质体的制备。

取大豆卵磷脂(卵磷脂)、胆固醇和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)溶解于乙醚溶剂中，大豆卵磷脂重量配比为150-250份，优选为200份，胆固醇重量配比为30-90份，优选为50份，吐温80重量配比为20-100份，优选为60份，恒温50℃减压旋转蒸发掉有机溶剂，使大豆卵磷脂在蒸发溶器底形成一层薄膜后，加入适量0.3mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，其中乙醚溶剂与0.3mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液体积比1∶1到5∶1，优选为3∶1，调节pH1-4，继续旋转蒸发水合20-40分钟，优选为30分钟后，用0.45微米滤膜过滤后得到空白脂质体溶液；

②扇贝抗氧化肽脂质体的制备

在步骤①的空白脂质体溶液中加入扇贝抗氧化肽干粉(见中国专利公开号CN1660892制)，添加重量配比为5-40份，优选为20份，混合均匀后，再使用饱和Na₂HPO₄溶液将pH调高3，pH梯度3-6后进行超声5-10分钟，得扇贝抗氧化肽纳米脂质体，4℃放置保存。

按照本发明提供的扇贝抗氧化肽脂质体(简称脂质体)的制备方法中，所述扇贝抗氧化肽脂质体的包封率按下列方法测定。

取空白脂质体5ml至Millipore超滤杯中超滤，使用1万分子量超滤膜截留脂质体，滤出液中检测不到磷含量，说明超滤膜对脂质体能够完全截留。

取制备好的扇贝抗氧化肽脂质体5ml至Millipore超滤杯中超滤，使用1万分子量超滤膜截留脂质体，收集一定体积的滤出液，测定其中游离的扇贝抗氧化肽(PCF)总量，计算包封率。