[发明专利]一种淫羊藿苷单体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种淫羊藿苷的制备方法，特别设计一种制备高纯度淫羊藿苷单体的方法。

背景技术

现代中药药理学研究表明，淫羊藿具有良好的补肝肾、强筋骨、祛风湿、抗衰老、提高免疫力、抑制肿瘤等药理作用，因此受到了国内外学者的广泛重视，并对淫羊藿属植物的资源种类、地理分布、化学成分和药理作用进行了深入的研究。近些年在淫羊藿属植物中发现的化合物以黄酮为主，一般认为具有8-异戊烯基的黄酮及其苷类是淫羊藿对心血管及免疫促进活性的主要成分，并具有抗肿瘤活性。其中淫羊藿苷为特征成分，具有增加雌二醇的含量，并刺激肾上腺酮的分泌，改善性功能；降低感染病毒肝细胞的谷丙转氨酶和山梨醇脱氢酶的释放水平，具有抗肝毒素等免疫功效以及抗肿瘤作用等。

为了深入研究淫羊藿苷的药理活性，淫羊藿苷单体成分制备的研究也得到了相应的重视。如专利CN101607976A采用溶剂反复萃取，硅胶柱和聚酰胺柱色谱分离的方法制得了纯度大于98％的淫羊藿苷；专利CN101747391A经过初步柱分离和醇沉除杂脱色，最后采用制备型高效液相色谱获得了纯度大于98％的淫羊藿苷化学对照品。

在淫羊藿苷单体成分的制备分离方法研究上大多采用柱层析的分离纯化手段，其应用十分广泛，具有上样量大等优点，它的缺点是操作步骤繁琐，样品回收率低。还有相关研究采用高效液相色谱分离等得到了纯度很高的淫羊藿苷单体成分，但是仪器成本昂贵，溶剂消耗量大也制约了该技术的发展。

然而，高速逆流色谱(HSCCC)作为二十世纪七八十年代间发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，结合了液液萃取和分配色谱的优点，是一种无需任何固态载体或支撑的液-液分配色谱技术。通过行星式运转过程中产生的离心力，使两种互不相溶的溶剂在高速旋转的螺旋管中单向分布，其中一项作固定相，由恒流泵输送载有样品的流动相穿过固定相，利用样品在两相中分配系数的不同实现分离。HSCCC作为一种常用的分离纯化技术，具有无不可逆吸附，回收率高，操作简单快捷，进样量大，分离效率高等诸多优点。十分适合于天然植物提取物的分离和纯化，以及高纯度标准样品的制备。

发明内容

本发明的目的是提供一种淫羊藿苷单体制备方法。

为了本发明的目的，本发明提供一种式I所示的淫羊藿苷单体的制备方法，采用半制备型高速逆流色谱仪，包括如下步骤：

1)制备氯仿、甲醇和水的三元溶剂，取其上相为固定相，下相作为流动相，将淫羊藿苷粗品溶于下相；

2)将高速逆流色谱仪柱子中注满步骤1)制备的固定相，转动主机；

3)将步骤1)制备的流动相泵入色谱柱，再由进样阀进入下相溶解的淫羊藿苷粗品，根据检测器图谱接收目标成分，将含有目标物成分的溶液浓缩，冷冻干燥。

式I

其中，所述的氯仿、甲醇和水的三元溶剂中氯仿、甲醇和水的体积比为2～5∶2～5∶2，优选为体积比3.5∶2.5∶2。

其中，用于检测本发明淫羊藿苷的检测波长为280nm。

其中，所述的高速逆流色谱仪的流速为2～4mL/min，优选为3mL/min。

其中，所述的高速逆流色谱仪的转速为700～1000rpm，优选为900rpm。

其中，所述的分离温度为20～30℃。

根据本发明，可分离200～400mg的淫羊藿粗品，优选的淫羊藿粗品的纯度为30～70％。

其中，所述的淫羊藿粗品为固体，可通过本领域公知的方法制备，如根据CN200510061251.1公开的方法制备；也可市售获得，如购自西安三江生物工程有限公司。

根据本发明，可用高效液相色谱对分离得到的样品进行检测，色谱条件为WondaSil C18色谱柱(5μm，250×4.6mm i.d.)，乙腈∶水＝27∶73作为流动相，流速1mL/min，柱温：30℃，检测波长：270nm，分析时间：30min。

根据本发明，采用Bruker 500MHz超导核磁共振谱仪进行¹H-NMR及¹³C-NMR分析，氘代溶剂为二甲基亚砜。

用本法制备的淫羊藿苷单体化合物纯度可达98％以上，制备量在克量级。本法适合于不同的淫羊藿苷粗品为原料制备的高纯度的淫羊藿苷单体化合物。本法具有技术工艺先进、分离效率高、回收率高、产品纯度高、制备量较大等特点。与用高效液相色谱制备淫羊藿苷单体的方法相比，本发明提供的方法更能节省溶剂，而且制备量大，样品纯度高。

附图说明