[发明专利]大黄鱼脂肪细胞体外培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞培养方法，具体涉及一种大黄鱼脂肪细胞体外培养方法。

背景技术

我国是世界上产量最大的水产养殖大国，养殖鱼类脂肪的过度蓄积已是当前困扰养殖业的主要问题之一。大黄鱼[Pseudosciaena crocea (Richardson)]是我国重要的经济鱼类，由于过量捕捞，产量急剧下降。1987年我国大黄鱼人工育苗获得成功，并在1994年开始人工养殖。但养殖大黄鱼体型差，鱼肉口感、营养价值远不及野生大黄鱼（段青源等，2000），因此无法满足市场“质”的需求，大量研究表明，脂肪的过度沉积是影响体型、口感的重要因素之一（缪伏荣等2008；徐继林等，2005）。而且养殖过程中因为脂肪大量沉积，脂肪肝的高发生率严重影响了养殖的经济效益（刘振勇等，2007；曾端等，2008），影响了大黄鱼养殖的可持续发展。因此如何改善大黄鱼肉质，降低脂肪的过多沉积是当前最具有现实经济意义的重大课题。要改善脂肪过多沉积的问题，首先要了解鱼的脂肪代谢和脂肪沉积的机制。

脂肪组织的形成是脂肪细胞增殖、分化和凋亡等过程综合作用的结果；当前体脂肪细胞过度增殖和分化，凋亡程度降低时，脂肪组织就会过度增长，从而造成水产品脂肪过多沉积，影响水产品的肉质品质。控制体脂沉积的实质就是降低脂肪细胞的数目和减小脂肪细胞的体积，也就是抑制前体脂肪细胞的增殖与分化，促进细胞凋亡进行；因此研究前体脂肪细胞的增殖、分化和凋亡及其控制机制，可以为控制体脂沉积提供理论依据。脂肪细胞体外培养这种方法已经成为研究脂肪沉积机制、脂肪细胞增殖与分化以及分化过程中分子事件和标志基因表达的有效手段。

关于脂肪细胞的培养，历史悠久，1961年，Hauner等首先进行小鼠脂肪细胞离体培养的实验工作（宋文华等，2006），20世纪80年代，Hausman首先采用SVF细胞，通过培养，就激素和生长因子对猪不同阶段的脂肪分化影响进行了研究，直到今天，脂肪细胞的培养主要集中在小鼠、畜类等哺乳动物上，在鱼中开展的相关工作较少。

2003年，Vegusdal等首次在体外成功培养了大西洋鲑的脂肪细胞，随后2006年，Oku等，进行了真鲷（Pagrus major）脂肪细胞的培养，2007年，刘茜在草鱼中做了脂肪细胞的培养，但是目前作为我国重要经济海产鱼类--大黄鱼的脂肪培养相关工作尚未见报道。大西洋鲑属于冷水性动物，其培养条件和温度无法直接应用于大黄鱼，真鲷是采用无血清培养技术，目前应用于大黄鱼有相当的困难，而草鱼属于淡水性草食鱼类，其生理状态和培养参数也无法直接利用于大黄鱼。 在这种前提下，研究大黄鱼脂肪细胞体外培养方法，从而为研究大黄鱼脂肪代谢和脂肪沉积问题提供物质基础和有效手段就显得意义重大。

文中所用的参考文献如下：

1、Oku H, Tokuda M, et al. Effects of insulin, triiodothyronine and fat soluble vitamins on adipocyte differentiation and LPL gene expression in the stromal-vascular cells of red sea bream, Pagrus major. Comparative Biochemistry and Physiology, 2006, 144:326-33（Oku，Tokuda等，胰岛素，T3及脂溶性维生素对真鲷脂肪细胞分化及LPL基因表达的影响。 比较生理生化, 2006, 144:326-333）。

2、Vegusdal A, Sundvold H, et al. An in vitro method for studying the proliferation and differentiation of atlantic salmon preadipocytes. Lipids, 2003, 38:289-296.（Vegusda, Sundvold等，一种体外研究大西洋鲑前体脂肪细胞增殖分化的方法。脂肪，2003, 38:289-296. ）。

3、段青源，钟惠英等. 网箱养殖大黄鱼与天然大黄鱼营养成分的比较分析[J]. 浙江海洋学院学报，2000，19(2)：125-128。

4、缪伏荣，刘景等. 对不同养殖模式大黄鱼营养成分的比较[J]. 现代农业科学 2008，15（9）：72-74。

5、刘茜， 吉红，等. 草鱼脂肪细胞提取与保存的研究[J]. 水利渔业，2007，27（2）：7-8。