[发明专利]一种基因芯片及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及的是一种可以快速检测六种动物源性人兽共患病的基因芯片。 

背景技术

禽流感（Avian influenza，AI）、狂犬病（Rabies）、猪链球菌2型（Streptococcus suis , SS2）、炭疽（Anthrax）、沙门氏菌（Salmonella）、大肠杆菌O157（Escherichia coli O157）是近年来发生较为普遍、与人们生活息息相关的六种动物源性人兽共患病传染病，一度给人们的健康和生活带来了很大的危害。其中江苏和四川分别于1998年、2005年发生了SS2大规模流行的公共卫生事件，并造成人员伤亡，近年来在南方各省每年都有散发的病例；香港和台湾分别于1997年、2004年曾发生高致病性禽流感（HPAI）流行事件，造成数以百万的禽类遭捕杀且有人感染H5N1死亡的报道；狂犬病作为一种古老的疾病，自报道后每年都有散在病例发生，据报道我国是仅次于印度属于世界上第二大狂犬病发病国家；沙门氏菌和大肠杆菌主要通过污染饮水和食物的方式造成群体发病；炭疽芽孢杆菌是食草类动物的一种重要疾病，而人类则可以通过接触感染动物以及感染动物的肉类、毛革制品感染发病。  

目前针对以上人兽共患病的传统诊断方法多为病原体的分离培养、生化鉴定、PCR技术、以及相关的血清学实验，以上诊断方法过程繁琐，需时较长且准确性不高，对于多血清型、多亚型的细菌和病毒更不能准确的判定出其类别，PCR技术准确性相对较高但是易出现假阳性以及一次只能鉴别少数几种病原。

因此，现有技术还有待于改进和发展。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因芯片及其检测方法，旨在解决现有的诊断病原的方法过程繁琐、需时长且准确性不高的问题。 

本发明的技术方案如下： 

一种基因芯片，其中，所述基因芯片的基质膜上固定有6种特异性探针；所述特异性探针分别为禽流感病毒探针、狂犬病病毒探针、猪链球菌2型探针、炭疽菌探针、沙门氏菌探针、大肠杆菌O157探针。

所述的基因芯片，其中，所述禽流感病毒探针序列如SEQ NO.1所示；所述狂犬病病毒探针序列如SEQ NO.2所示；猪链球菌2型探针序列如SEQ NO.3所示；沙门氏菌探针序列包括3条，分别如SEQ NO.4~6所示；炭疽芽胞杆菌探针如SEQ NO.7所示；大肠杆菌O157探针序列包括3条，分别如SEQ NO.8~10所示。 

所述的基因芯片，其中，所述特异性探针的5’端标记15-30 Poly T。 

所述的基因芯片，其中，所述基质膜为硅晶片、玻璃或高分子材料。 

上述的基因芯片的制备方法，其中，包括以下步骤： 

S1、在GenBank上分别选取禽流感病毒的M1基因、狂犬病病毒的NS基因、猪链球菌2型的CPS基因、炭疽芽胞杆菌的CapB基因、沙门氏菌的invA基因和大肠杆菌O157的rfbE基因序列，利用生物信息学软件Primer Express 2.0设计特异性探针；

S2、合成特异性探针；

S3、使用DR. Fast Spot芯片点样仪系统将特异性探针按照预先设计的矩阵点样，室温干燥10min；每份基因芯片均至少包含一个阳性对照和一个阴性对照；

S4、用紫外交联仪照射基因芯片7~10分钟，照射能量为1.2J，以固定特异性探针，最后依次用Milli-Q水和95%乙醇洗涤，干燥。

所述的基因芯片的制备方法，其中，所述S2步骤还包括：在特异性探针的5’端标记15-30 Poly T，以使特异性探针很好固定在基质膜上。 

所述的基因芯片的制备方法，其中，所述阳性对照为多聚PolyT，阴性对照为ddH₂O。 

使用上述基因芯片的检测方法，其中，包括以下步骤： 

S1、检测病原特异性引物设计：在GenBank上分别选取禽流感病毒的M1基因、狂犬病病毒的NS基因、猪链球菌2型的CPS基因、炭疽芽胞杆菌的CapB基因、沙门氏菌的invA基因和大肠杆菌O157的rfbE基因序列，利用生物信息学软件Primer Express 2.0设计病原特异性引物；并在病原特异性引物对的上游引物标记生物素biotin；

S2、核酸提取：使用DNA/RNA磁珠提取试剂盒提取待测样品的核酸，获取下一步核酸扩增用的模板；