[发明专利]鹿布氏杆菌病间接酶联免疫吸附检测法

权利要求书

1.鹿布氏杆菌病间接酶联免疫吸附检测法，其特征是：

(1)所用生物材料包括：作为抗原的布氏杆菌猪型2号苗、酶标抗体兔抗鹿IgG-HRP、标准阳性血清、标准阴性血清、待检血清：

(2)检测步骤包括：

①抗原包被

在酶标板上选定待检血清、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、酶标抗体对照、抗体对照孔及底物对照七种培养孔；将经超声波粉碎的布氏杆菌猪型2号苗用抗原稀释液以疫苗比稀释液1∶12.5-1∶50的比例稀释，等量加入待检血清孔、阳性血清对照孔、阴性血清对照孔及抗原对照孔中，在兔抗鹿IgG-HRP对照孔、抗体对照孔及底物对照孔中加入与前述抗原液等体积的浓度为50mg/ml的牛血清白蛋白，之后将酶标板置35℃-42℃温箱孵育2-4h；

②洗涤

取出酶标板，甩去微孔中的溶液，向全部待检血清孔和对照孔加入洗液，加入量为将孔加满为止，室温下放置3min以上，然后倒掉，如此反复三次，空干；

③加血清

将被检血清加稀释液按血清比稀释液1∶50-1∶200的比例稀释，等量加到待检血清孔中、在阳性血清对照孔和抗体对照孔中加入用8-10倍标准阳性血清体积的稀释液稀释的阳性血清液，在阴性血清对照孔中加用8-10倍标准阴性血清体积的稀释液稀释的阴性血清液，在抗原对照孔中加入血清稀释液，前述材料的加入量均与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，之后置37℃温箱中0.25-1h后，3×3’洗涤；

④加兔抗鹿IgG-HRP

将兔抗鹿IgG-HRP用抗原稀释液按兔抗鹿IgG-HRP比稀释液1∶1600-6400的比例稀释，等量加入全部待检血清孔孔和对照孔中，每孔加入量与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，之后置35℃-42℃温箱中0.25-1h后，3×3’洗涤；

⑤加底物液

在全部待检血清孔和对照孔中加底物液，每孔加入量与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，置35℃-42℃温箱中0.25-1h。

⑥终止反应

取出反应板，在全部待检血清孔和对照孔中加的2M H₂SO₄，以终止反应，每孔加入量为步骤①中每孔所加抗原液的体积的1/2；

⑦使用仪器测量

完成步骤⑥的酶标板静止5min后，将其放在酶联免疫检测仪上，在490nm处空白调零，并测每孔的OD值，OD值≥0.32判定为阳性。