[发明专利]胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，包括有样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素包被膜(3)、吸水垫(6)，所述样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素包被膜(3)、吸水垫(6)由底板(7)的一侧依次向所述底板(7)的另一侧相互搭接粘贴在所述底板(7)上，其特征在于：

所述的结合垫(2)包被有金标抗体a和金标抗体b；

所述的硝酸纤维素包被膜(3)上设置有检测线(4)和质控线(5)，所述的检测线(4)包被有Ro52抗原蛋白，所述的质控线(5)包被有金标抗体c。

2.根据权利要求1所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述金标抗体a中的抗体A为抗人IgG单克隆抗体、抗人IgG多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述的抗人IgG多克隆抗体为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源中的一种；所述的抗人IgG单克隆抗体为鼠源或兔源中的一种。

4.根据权利要求1所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述金标抗体a中的抗体A为葡萄球菌A蛋白。

5.根据权利要求1所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述的金标抗体b中的抗体B和金标抗体c中的抗体C同时或不同时为单克隆抗体或多克隆抗体中的一种，其中金标抗体b中的抗体B和金标抗体c中的抗体C可发生特异性结合形成免疫复合物。

6.根据权利要求5所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述的多克隆抗体为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源中的一种，所述的单克隆抗体为鼠源或兔源中的一种。

7.根据权利要求1所述的胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其特征在于：所述的检测线上包被的Ro52抗原蛋白为通过原核表达克隆化基因获得的Ro52抗原蛋白。

8.一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，硝酸纤维素包被膜的制备

(1)Ro52抗原蛋白的制备，通过原核表达克隆化基因获得Ro52抗原蛋白；

(2)金标抗体c的制备：用0.1M碳酸钾调节胶体金pH 7.0～9.0，按每毫升胶体金溶液缓慢加入4～25μg抗体C，搅拌10～30min，然后加入BSA至终浓度0.5～5％，搅拌10～30min，离心，弃上清，将沉淀用洗涤液洗涤2～3次，末次用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬，置4℃备用；

(3)硝酸纤维素包被膜的制备，用包被膜缓冲液稀释步骤(1)制备的Ro52抗原蛋白至浓度为0.5～1.5mg/mL，包被于硝酸纤维素包被膜的检测线上；用包被膜缓冲液稀释将抗体c稀释到0.8～2.0mg/mL，以1～10μl/cm包被于硝酸纤维素膜的质控线上，硝酸纤维素包被膜制备好以后置放于37℃烘干备用；

步骤2，结合垫的制备

(1)金标抗体a的制备：用0.1M碳酸钾调节胶体金pH 7.0～9.0，按每毫升胶体金溶液缓慢加入4～25μg抗体A，搅拌10～30min，然后加入BSA至终浓度0.5～5％，搅拌10～30min，离心，弃上清，将沉淀用洗涤液洗涤2～3次，末次用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬，置4℃备用；

(2)金标抗体b的制备：用0.1M碳酸钾调节胶体金pH 7.0～9.0，按每毫升胶体金溶液缓慢加入4～25μg抗体B，搅拌10～30min，然后加入BSA至终浓度0.5～5％，搅拌10～30min，离心，弃上清，将沉淀用洗涤液洗涤2～3次，末次用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬，置4℃备用；

(3)结合垫的制备：经处理液浸渍处理的聚脂膜，烘干后，将金标抗体a和金标抗体b混合后，以0.5～4μl/cm的用量喷涂在预处理的聚脂膜上，25℃～37℃干燥后得结合垫，结合垫置于2℃～8℃的环境下备用；

步骤3，样品垫的制备

将玻璃纤维膜经处理液浸渍处理后制成样品垫，样品垫于37℃烘干后备用；

步骤4，在底板上顺次相互搭接粘贴经前述步骤1-3所制作完成的硝酸纤维素包被膜、结合垫、样品垫和吸水垫；

步骤5，对步骤4所制作完成的材料，切割成试纸条。