[发明专利]胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗Ro52抗体的试纸及其制备方法。

背景技术

SS-A抗原是一种小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质(分子量分别为52和60kDa)组成，抗-SS-A 60kDa蛋白的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗SS-A 52kDa的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其它抗体发生交叉反应。

在鉴别诊断中，抗SSA/Ro抗体对干燥综合症和SLE具有极高的特异性。尤其是抗Ro抗体与60KD Ro蛋白(Ro60)和52KD Ro蛋白(Ro52)的免疫反应，分别用于辨别SLE和原发性干燥综合症。SS-A/Ro抗体见于85％-95％的干燥综合症病人。因此，此抗体是鉴别此病的主要指标。抗Ro52抗体与抗Ro60抗体相比，对原发性干燥综合症具有更高的特异性。在超过60％的原发性干燥综合症病人中可单独检测到Ro52自身抗体，而只有5％的SLE病人可单独检测到此抗体。

本发明采用大肠杆菌原核表达人源基因工程方法Ro52，即为本产品的检测抗原。

目前实验室常用的检测抗RO52抗体的方法主要有酶联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、间接免疫荧光法(indirect immunoflurescence，IFF)、免疫印迹法(immunoblottingtest，IBT)、线性免疫分析法(Line immuno assay，LIA)等。

免疫印迹法虽综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，且试剂具有较强的毒性和污染性。

间接免疫荧光法可作半定量测定，但需有荧光显微镜观察结果，结果判定的客观性不足，标准化困难，技术程序比较复杂，也不适合高通量标本的检测。

线性免疫分析法主要用于疾病大类的筛查，针对性相对较差，同时也不适合高通量样本的检测。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，且易受温度和孵育条件的影响，在专业实验室里进行操作，给实验带来诸多不便。

目前市场上商品化抗Ro52抗体检测试剂盒主要为酶联免疫吸附法，需多次加样和洗涤步骤，完成整个实验过程需三小时左右，需酶标仪，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，易受人员和场地的限制，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。

胶体金层析法应用到抗Ro52抗体的检测中。胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay，GICA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，以条状纤维层析材料为固相，通过毛细效应使样品溶液在层析条上泳动，使样品中的待测物与结合垫上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生免疫反应，并与条状纤维层析材料上的抗原(或抗体)发生免疫反应而被截留，进而形成肉眼可见的紫红色条带，得到直观的实验结果，达到快速检测的目的(Sikowicz G et al.One-stepchromatographic immunoassay for qualitative determination ofchoricogonadotropin in urine.Clin Chem.1990(36)1579-1586.)。使用时只将样品加样到样品垫上，数分钟就根据检测线上紫红色条带出现情况来判断阴阳性结果。与其他检测方法相比，检测时间短，只需要5～10分钟，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便等优势。

在自身免疫性疾病方面，目前国外市场上出现了一些检测自身免疫疾病的试纸条产品，但抗Ro52抗体的胶体金免疫试纸在国内外市场上仍没有问世。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服以上方法学的不足，将胶体金层析法应用到抗Ro52抗体的检测中，同时首次将Ro52抗原蛋白应用到胶体金层析法中，采用间接法来实现血液中的抗RO52抗体检测，实现高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，快速筛选出抗RO52抗体的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断干燥综合症。

本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸。

本发明所要解决的技术问题之二在于提供一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸的制备方法。