[发明专利]用于检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的引物序列及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种用于检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的引物序列及检测方法。

背景技术

种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节。随着育种进程的加快，黄瓜新品种数量不断增加，需要进行品种纯度鉴定的材料量将会越来越大。以往常规的纯度鉴定都是在田间进行，结瓜期由专家到田间观察品种的特征特性及一致性，存在周期长、工作量大、易受环境因素的影响、表型特征会有一定程度偏差等问题，可能影响品种纯度鉴定的准确性，并直接影响到到良种的推广；此外由于鉴定周期长，当年生产的种子往往要到次年才能销售，造成商机丧失。

分子标记技术的诞生，为种子纯度的分子鉴定奠定了技术基础。分子标记可以直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题。尤其是微卫星(SSR)技术，微卫星DNA数量多且均匀分布在基因组中，具有丰富的多态性，并且微卫星位点检测可以显示纯合子和杂合子，易检测、重复性好、省时，适合于大通量分析。目前黄瓜种子纯度的SSR鉴定方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的引物序列。

本发明的另一个目的是克服现有技术的不足，提供一种能快速地检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的方法。

本发明的技术方案概述如下：

用于检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的引物序列，它由上游引物和下游引物组成，所述上游引物是序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列。

检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤：

(1)提取津优35号黄瓜杂交种子基因组DNA；

(2)进行PCR扩增：在PCR扩增专用薄壁管中加入津优35号黄瓜杂交种子基因组DNA10～20ng，再加入序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列15～30ng、序列表中SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列15～30ng、1倍的含Mg²⁺的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0.5～1单位，加无菌重蒸馏水至10μl；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为：94℃预变性180秒；94℃变性30秒，50-55℃退火30秒，72℃延伸60秒，30个循环；再72℃延伸7min，扩增完成；

(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析：将扩增产物采用6％变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；

(4)依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优35号黄瓜杂交种子纯度。

本发明具有快速、简便、稳定、可靠、低成本、不受环境条件影响等优点，对津优35号黄瓜杂交种子纯度进行鉴定只需要5-6小时就可以完成一个批次的鉴定。节省了大量人力、地力，鉴定结果快速准确。在黄瓜种子纯度鉴定上具有很大的应用价值。

附图说明

图1为津优35号黄瓜PCR扩增产物的凝胶电泳图.

具体实施方式

下面结合附图及具体实施例对本发明作进一步的说明，下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

检测津优35号黄瓜杂交种子纯度的方法，包括如下步骤：

(1)提取津优35号黄瓜杂交种子发芽35小时后根尖的基因组DNA；

(2)进行PCR扩增：在PCR扩增专用薄壁管中加入津优35号黄瓜杂交种子基因组DNA10ng，再加入序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列15ng、序列表中SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列15ng、1倍的含Mg²⁺的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0.5单位，加无菌重蒸馏水至10μl；将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为：94℃预变性180秒；94℃变性30秒，50℃退火30秒，72℃延伸60秒，30个循环；再72℃延伸7min，扩增完成；

(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析：将扩增产物采用6％变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相；