[发明专利]SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法无效
| 申请号： | 201110034229.3 | 申请日： | 2011-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN102174563A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 开国银;周聪聪;张昂;鞠冠华;陈莹;郭莺莺 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/52;C12N15/54;C12Q1/68;A01H5/00;A01H5/06 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 200234 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | smdxs smggpps 基因 转化 提高 丹参 含量 方法 | ||
1.SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因SmDXS和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因SmGGPPS插入植物表达载体，构建重组载体；所述的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因序列分别为SEQ ID：1和SEQ ID：2的DNA序列；
(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；
(3)用步骤(2)所得含有重组载体的发根农杆菌介导1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因转化丹参，获取毛状根；
(4)检测步骤(3)毛状根中的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根。
2.权利要求1所述SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法，其特征在于，步骤(1)所述的植物表达载体为pCAMBIA质粒或pBI质粒。
3.权利要求1所述SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法，其特征在于，步骤(2)所述发根农杆菌为发根农杆菌菌株C58C1、发根农杆菌菌株A4或发根农杆菌菌株L BA9402。
4.权利要求1所述SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，用所述步骤(2)所得含有重组载体的发根农杆菌介导1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因转化丹参幼嫩叶片，获取毛状根
5.权利要求1所述SmDXS和SmGGPPS双基因共转化提高丹参酮含量的方法，其特征在于，步骤(4)所述检测1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的方法为PCR及Southern blotting检测。
6.一种用于提高丹参酮含量的重组载体，其特征在于，含有1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因。
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