[发明专利]一种测定HMG-CoA还原酶抑制剂浓度的方法

权利要求书

1.一种测定HMG-CoA还原酶抑制率的方法，包括下述步骤：

1)建立如下的HMG-CoA还原酶酶促反应体系：

加入待测样品的待测样品反应体系，和

加入与待测样品相同体积去离子水的阴性对照反应体系；

2)通过HPLC-MS/MS法测定所述待测样品反应体系和所述阴性对照反应体系中MVAL各自的浓度；

3)通过式子：

HMG-CoA还原酶抑制率＝[(MVAL在所述阴性对照反应体系中的浓度-MVAL在所述待测样品反应体系中的浓度)/MVAL在所述阴性对照反应体系中的浓度]×100％，

计算得到HMG-CoA还原酶抑制率。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测样品为HMG-CoA还原酶抑制剂，例如羟基洛伐他汀酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤2)中通过HPLC-MS/MS法测定所述阴性对照反应体系和所述待测反应体系中MVAL各自的浓度，包括如下步骤：

A.向所述阴性对照反应体系和所述待测反应体系中分别加入盐酸，并混匀，静置，使MVA转化为MVAL；

B.用甲醇和0.1N的盐酸依次预处理ENV-SPE小柱；

C.将步骤A中得到样品溶液分别上ENV-SPE小柱；

D.用0.1N的盐酸和去离子水依次洗脱ENV-SPE小柱；

E.用甲醇洗脱步骤D处理后的ENV-SPE小柱，富集流分，得到洗脱液；

F.将步骤E中得到的洗脱液进行干燥，得到干燥物；

G.将步骤F中得到的干燥物用氨水重新溶解，混匀，静置，使MVAL转化为MVA；

H.将步骤G中得到的样品进样HPLC-MS/MS系统。

4.根据权利要求3所述的方法，其满足如下的(1)-(5)项中的一项或者多项：

(1)步骤A中的静置为30分钟；

(2)步骤F中的干燥通过在40℃下，氮气吹干进行；

(3)步骤G中的氨水的浓度为0.2％；

(4)步骤G中的静置为30分钟；

(5)步骤H中，样品在15℃自动进样器中稳定24小时。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，

HPLC条件如下：

流动相               10mM甲酸铵(pH8.0)：乙腈，70/30(v/v)

流速                 0.8mL/min(无分流)

洗针溶液             50∶50甲醇/水(v/v)

进样体积             30μL

数据采集时间         3min

柱温                 室温

自动进样温度         室温；

转换阀的转换时间T1设置在第一个色谱峰出峰前0.5分钟，转换时间T2设置在最后一个色谱峰出峰至少0.5分钟后；

MS/MS条件：

MVA：

极性                 负模式

母离子质荷比(m/z)    147.0

子离子质荷比         59.1

延滞时间             200msec

停顿时间             5msec

保留时间         约1.8min；

MVA-d7：

极性             负模式

母离子m/z        154.0

子离子m/z        59.1

延滞时间         200msec

停顿时间         5msec

保留时间         约1.8min。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，通过如下方法计算MVAL的浓度：

确定色谱峰保留时间和峰面积，以峰面积比率和浓度得到曲线，由该曲线计算出MVAL的浓度，即采用线性回归根据以下公式计算出MVAL的浓度：

y＝ax+b

其中：

y＝MVA与内标物MVA-d₇的峰面积比率，

b＝曲线的截距，

a＝曲线的斜率，

x＝MVAL的浓度。