[发明专利]用于检测诱惑红的方法及酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测诱惑红的酶联免疫试剂盒，包括诱惑红半抗原和诱惑红的特异性抗体；所述特异性抗体为诱惑红的多克隆抗体或单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

1)所述半抗原与载体蛋白偶联，得到的半抗原-载体蛋白偶联物作为包被原，所述特异性抗体为酶标记的；或者

2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原为酶标记的。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括抗抗体，如羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；并且：

1)所述半抗原与载体蛋白偶联，得到的半抗原-载体蛋白的偶联物作为包被原，所述抗抗体为酶标记的；

2)所述抗抗体作为包被原，所述半抗原为酶标记的。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括诱惑红标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液中的至少一种。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述诱惑红半抗原或诱惑红半抗原-载体蛋白偶联物、所述诱惑红特异性抗体、所述抗抗体中的任一种已包被在酶标板上。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标记中所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，使用的底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液，终止液为1-2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液；当标记酶为碱性磷酸酶时，使用的显色剂为硝基磷酸盐缓冲液，终止液为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为pH值为6-9、含有终浓度为0.02-0.05％(质量)的防腐剂、终浓度为1.0-2.0％(质量)的吐温-20、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，优选地，所述浓缩洗涤液为pH值为7.4、含有终浓度为0.03％(质量)的防腐剂、终浓度为1.5％(质量)的吐温-20的0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有终浓度为5-10％(质量)的DMSO、pH为6-8的0.1-0.2mol/L磷酸盐缓冲液，优选地，所述浓缩复溶液为含有终浓度为8％(质量)的DMSO、pH为7.4的0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液；所述终止液为2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液。

8.一种检测样品中的诱惑红含量的方法，包括以下步骤：

1)用诱惑红半抗原或诱惑红半抗原-载体蛋白偶联物包被酶标板；

2)将诱惑红标准品或待测样品加入所述包被的酶标板孔内，然后每孔加入酶标记的诱惑红特异性抗体，孵育，洗涤；

3)加入底物显色液显色；

4)加入反应终止液终止反应；

5)通过比较诱惑红标准品与待测样品的颜色，推测出待测样品中的诱惑红含量；或者，测定各孔的吸光度，建立诱惑红浓度相对于吸光度的标准曲线，并根据该标准曲线由待测样品的吸光度推算出待测样品中的诱惑红含量。

9.一种检测样品中的诱惑红含量的方法，包括以下步骤：

1)用诱惑红半抗原或诱惑红半抗原-载体蛋白偶联物包被酶标板；

2)加入诱惑红标准品或待测样品；

3)加入诱惑红特异性抗体，孵育，洗涤；

4)加入酶标记的抗抗体，孵育，洗涤；

5)加入底物显色液显色；

6)加入反应终止液终止反应；

7)通过比较诱惑红标准品与待测样品的颜色，推测出待测样品中的诱惑红含量；或者，测定各孔的吸光度，建立诱惑红浓度相对于吸光度的标准曲线，并根据该标准曲线由待测样品的吸光度推算出待测样品中的诱惑红含量。

10.根据权利要求8或9所述的检测样品中诱惑红含量的方法，还包括样品前处理步骤，其中：

当所述样品为液体食品时，所述样品前处理方法为：将液体食品除去气体，与样本稀释液以体积比1∶10-15混合，取混合后样品用于分析；

当所述样品为糖果、话梅类食品时，所述样品前处理方法为：将待检物粉碎，与样本稀释液以质量体积比为1∶5-10混匀，离心，取上清与样本稀释液以一定比例稀释后检测。

当所述样品为冰激凌、糕点时，样品置于水浴溶解，均质化，加一定量的正己烷脱脂，与样本稀释液以质量体积比为1∶10-15混匀，离心，取下层检测。