[发明专利]用于检测诱惑红的方法及酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测诱惑红的方法及酶联免疫试剂盒。

背景技术

诱惑红是食用色素的一种，呈鲜艳的深红色，单色品种。该色素稳定性优良，被广泛用于食品、饮料、药品、化妆品、饲料、烟草、玩具、食品包装材料等的着色。水溶性合成色素，鲜艳的深红色，应用于糖果包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕点、饮料等的着色。

但是长期食用诱惑红对身体会产生危害，为一般毒性、致泻性甚至致癌性，尤其是偶氮化合物类合成色素的致癌作用明显。偶氮化合物在体内分解，可形成丙种芳香胺化合物，芳香胺在体内经过代谢活动后与靶细胞作用可能引起癌变。此外，食用合成色素在生产过程中还可能混入砷和铅，能导致皮下肉瘤、肝癌、肠癌及恶性淋巴癌等。

诱惑红属于食用红色色素。中国《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760？D1996)中规定：诱惑红可用于糖果包衣，最大使用量0.085g/kg；用于冰淇淋、雪糕、苹果干、燕麦片(调香、调色载体)、可可玉米片(即食早餐谷类食品)为0.07g/kg；用于炸鸡调料为0.04g/kg；用于冰棍、糖果、糕点彩装、红绿丝、染色樱桃罐头、红肠肠衣、果汁饮料、果汁酒(色淀除外)，最大用量0.05g/kg；用于果汁(味)型饮料，0.025g/kg(按稀释6倍计)。

通常，检测诱惑红的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、纸上层析法、分光光度法等等。HPLC法与分光光度法是诱惑红残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用。理化检测法多以有机溶剂萃取后过层析柱，然后观察颜色进行诱惑红残留的判断，此方法主观性强，对微量残留很难进行测定，而且无法定量，因此很难符合检测单位实际使用的要求。而酶联免疫分析(ELISA)快速检测技术因灵敏度高、特异性好、既可定性又可定量，且成本低、操作简单快速、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。并且经过检索相关的文献与专利并未发现国内外有关于诱惑红免疫检测的方法与试剂盒。

总之，现有酶联免疫试剂盒采用的检测方法复杂、繁琐，很难应用于实践，且现有技术由于普遍存在稳定性差、样品前处理及检测步骤复杂、设备条件要求较高、价格昂贵等不足，严重影响了诱惑红残留检测与监控，因此研制稳定性高、操作简单、设备要求低、廉价的诱惑红ELISA检测试剂盒具有非常重要的经济和社会意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测诱惑红的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的检测诱惑红的酶联免疫试剂盒，包括诱惑红半抗原和诱惑红的特异性抗体；所述特异性抗体为诱惑红的多克隆抗体或单克隆抗体；其中，所述半抗原和诱惑红的特异性抗体可以以下述任一种形式存在：

1)将诱惑红半抗原与载体蛋白进行偶联，得到诱惑红半抗原与载体蛋白的偶联物(以下称为半抗原-载体蛋白偶联物)，将其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述试剂盒还可以既包括半抗原和诱惑红的特异性抗体，又包括抗抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；其中，所述半抗原和抗抗体以下述任一形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原-载体蛋白偶联物，将其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述诱惑红多克隆抗体或诱惑红单克隆抗体，均是用所述诱惑红半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白可为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白等。

所述单克隆抗体是通过杂交瘤细胞技术得到的。所述诱惑红多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。

为了方便检测，所述试剂盒还可包括酶标板，当所述诱惑红特异性抗体或抗抗体用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述诱惑红半抗原或诱惑红半抗原-载体蛋白偶联物；当所述半抗原用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述诱惑红特异性抗体或所述抗抗体。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还可包括诱惑红标准品溶液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液中的至少一种；