[发明专利]一种固相多肽合成奥米加南的制备方法

权利要求书

1.本发明是一种固相多肽合成奥米加南的制备方法，包括以下步骤：

 （1）以Rink Amide MBHA树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc-保护基团的氨基酸，最后一个氨基酸使用Boc-Ile-OH，获得保护的十二肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团； 

 （2）切肽同时去除Boc和Pbf等侧链保护基团，获得粗品；

 （3）粗品经制备型HPLC（C18柱），分离纯化，加入15ml盐酸处理，减压除溶剂，冻干后，制得奥米加南精品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的依次连接具有Fmoc-保护基团的氨基酸，获得保护十二肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的方法，包括如下步骤：

   （1）制备Fmoc-Lys(Boc)-树脂：

取所说的树脂用DMF浸泡，使树脂溶胀，抽干，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，然后加入溶解于接肽试剂的Fmoc-Lys(Boc)-OH、HBTU和HOBt的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，再加入醋酐和DMF，反应，获得Fmoc-Lys(Boc)-树脂；

所说的接肽试剂为：NMM∶DMF=1∶5~15，体积比，下同；

所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF=1∶2~5，体积比，下同；

混合物中，溶剂对树脂重量的体积浓度为5~20ml/g；下同；

HBTU的摩尔数为树脂的2~6倍；下同；

HOBt的摩尔数为树脂的2~6倍；下同；

Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

脱帽试剂对树脂的加入量的比例为5~20ml/g；下同；

（2）制备Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（1）的Fmoc-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，然后加入溶解于接肽试剂的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、HBTU、HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

    （3）制备Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（2）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

    （4） 制备Fmoc-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂

在步骤（3）的树脂中，加入脱帽试剂，反应钟，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （5） 制备Fmoc-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（4）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （6） 制备Fmoc-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（5）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （7）制备Fmoc-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（6）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （8）制备Fmoc-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（7）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp-OH、/HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf) -Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （9）制备Fmoc-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（8）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)- Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上；

    （10）制备Fmoc-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（9）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp- Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)树脂；

混合物中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上;

    （11）制备Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤（10）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Leu-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp- Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上;

    （12）制备Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)- Lys(Boc)-树脂：

在步骤（11）的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Boc-Ile-OH、HBTU和HOBT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，获得Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)- Lys(Boc)-树脂；

混合物中，Boc-Ile-OH的摩尔数为树脂的2~6倍；

其余操作以及工艺条件同上。