[发明专利]检测Thl/Th2细胞因子核糖核酸的相对定量试剂盒

权利要求书

1.一条用于逆转录mRNA的共同引物，其特征是一条带标签的核苷酸序列，3’端带11个连续的胸腺嘧啶与mRNA的多聚腺嘌呤特异性互补，核酸序列为SEQID NO.1，可用于逆转录mRNA。

2.根据权利要求1所述的用于对mRNA进行定量PCR的对侧引物由SEQ ID NO.1内包含一个高质量的引物位置为SEQ ID NO.2。

3.根据权利要求1所述的用于对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.3，与人GAPDH mRNA一段互补。

4.根据权利要求1所述的用于对白细胞介素2(interleukin 2，IL-2)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.4，与人IL-2 mRNA一段互补。

5.根据权利要求1所述的用于对干扰素gamma(interferon gamma，INF-γ)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.5，与人INF-γmRNA一段互补。

6.根据权利要求1所述的用于对白细胞介素12(interleukin 12，IL-12)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.6，与人IL-12 mRNA一段互补。

7.根据权利要求1所述的用于对白细胞介素4(interleukin 4，IL-4)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.7，与人IL-4 mRNA一段互补。

8.根据权利要求1所述的用于对白细胞介素10(interleukin 10，IL-10)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.8，与人IL-10 mRNA一段互补。

9.根据权利要求1所述的用于对转化生长因子贝塔1(transforming growthfactor beta 1，TGF-b1)mRNA进行定量PCR的特异性引物SEQ ID NO.9，与人TGF-b1 mRNA一段互补。

10.根据权利要求1所述的对mRNA进行相对定量的一套试剂盒，其特征包括1，由下述试剂组成：

试剂A：5μM逆转录引物50μL；

试剂B：20U/μL M-MuLV逆转录酶，50μL；

试剂C：5×逆转录缓冲液，200μL含dNTP浓度为5mM(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)，Tris-HCl浓度为250mM，KCl浓度为250mM，MgCl₂浓度为20mM，50nM DTT；

试剂D：2×PCR缓冲液组成，1mL液体中包含100 U taq酶、600nM ROX，Green I dye，2mM dNTPs(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、80mM Tris-HCl、80mM KCl、40mM(NH₄)₂SO₄、6mM MgSO₄。

含引物的PCR 8联反应管24条：

一号反应管：含有扩增人GAPDH cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ IDNO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.3。

二号反应管：含有扩增人IL-2cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ ID NO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.4。

三号反应管：含有扩增人INF-γcDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ IDNO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.5。

四号反应管：含有扩增人IL-12 cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ IDNO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.6。

五号反应管：含有扩增人IL-4 cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ ID NO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.7。

六号反应管：含有扩增人IL-10 cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ IDNO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.8。

七号反应管：含有扩增人TGF-b1 cDNA的混合引物。包含1×10^-3nmol SEQ IDNO.2和1×10^-3nmol SEQ ID NO.9。