[发明专利]一种甲型H1亚型流感病毒双抗体夹心ELISA试剂盒及应用

权利要求书

1.一种抗甲型H1亚型流感病毒血凝素的单克隆抗体，其特征在于，它是由保藏号为CCTCCNO：V201105的甲型H1N1流感病毒A-Influ/JML-F9制备的杂交瘤细胞株所分泌的，所述的杂交瘤细胞株5F7保藏号为CCTCC NO：C201106。

2.一株抗甲型H1亚型流感病毒血凝素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5F7，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：C201106。

3.包含权利要求1所述的单克隆抗体的甲型H1亚型流感病毒双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。

4.一种适用于猪的甲型H1亚型流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于，该试剂盒由下列部分构成：保藏号为CCTCC NO：C201106的单克隆抗体包被的酶标板，辣根过氧化物酶标记的保藏号为CCTCC NO：C201106的单克隆抗体作为酶标二抗，样品处理A液、样品处理B液、阳性对照样品、阴性对照样品、底物A液、底物B液、终止液和10倍洗涤液；

其中：

所述的试剂组分及其配比如下：

(1)样品处理A液的配制：称取Na₂B₄O₇·10H₂O 13.3g，H₃BO₃ 16.08g，NaCl 8.5g，ddH₂O 800mL，调pH至8.4后用蒸馏水定容至1000mL；在121℃高压蒸汽下灭菌30分钟后分装，置4℃贮存；

(2)样品处理B液的配制：称取Na₂B₄O₇·10H₂O 13.3g，H₃BO₃ 16.08g，NaCl 8.5g，ddH₂O 800mL，调pH值为8.4后用蒸馏水定容至1000mL；在121℃高压蒸汽下灭菌30分钟后加入5g N-乙酰-L-半胱氨酸，5mL NP-40，混匀后分装，置4℃贮存；

(3)阳性对照的配制：将含病毒尿囊液冻融3次后，按终浓度0.8％的甲醛缓慢加入甲醛溶液，充分混合均匀，37℃灭活24小时，每隔6小时振摇1次；加入0.02％NaN₃防腐，并作为阳性对照样品分装成0.5mL/管，置4℃下保存；

(4)阴性对照的配制：收取SPF鸡胚尿囊液，4℃，12000r/min离心30min后加入0.02％NaN₃防腐。分装成0.5mL/管，置4℃下保存；

(5)底物A液：0.006％H₂O₂缓冲液；

(6)底物B液：取Na₂HPO₄·12H₂O 14.2g，柠檬酸10.5g，用ddH₂O定容至500m配成0.1mL磷酸盐柠檬酸缓冲液，pH5.0；按终浓度为20mg/L添加联苯二胺；

(7)终止液：浓度为40％氢氟酸溶液625μL，用ddH2O定容至100mL；

(8)10倍洗涤液：NaCl 80g，KCl 2g，Na₂HPO₄·12H₂O 29g，KH₂PO₄ 2g，Tween-20 5mL，用ddH₂O定容至1000mL，pH7.4。