[发明专利]一种甲型H1亚型流感病毒双抗体夹心ELISA试剂盒及应用有效
申请号: | 201110036167.X | 申请日: | 2011-02-11 |
公开(公告)号: | CN102633878A | 公开(公告)日: | 2012-08-15 |
发明(设计)人: | 金梅林;赵刚;但汉并;王灿;郭学波;周洪波;张安定 | 申请(专利权)人: | 华中农业大学 |
主分类号: | C07K16/10 | 分类号: | C07K16/10;C12N5/20;C12N7/00;G01N33/577;C12R1/91;C12R1/93 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人: | 王敏锋 |
地址: | 430070 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 h1 流感病毒 抗体 夹心 elisa 试剂盒 应用 | ||
1.一种抗甲型H1亚型流感病毒血凝素的单克隆抗体,其特征在于,它是由保藏号为CCTCCNO:V201105的甲型H1N1流感病毒A-Influ/JML-F9制备的杂交瘤细胞株所分泌的,所述的杂交瘤细胞株5F7保藏号为CCTCC NO:C201106。
2.一株抗甲型H1亚型流感病毒血凝素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5F7,保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏号为CCTCC NO:C201106。
3.包含权利要求1所述的单克隆抗体的甲型H1亚型流感病毒双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。
4.一种适用于猪的甲型H1亚型流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA试剂盒,其特征在于,该试剂盒由下列部分构成:保藏号为CCTCC NO:C201106的单克隆抗体包被的酶标板,辣根过氧化物酶标记的保藏号为CCTCC NO:C201106的单克隆抗体作为酶标二抗,样品处理A液、样品处理B液、阳性对照样品、阴性对照样品、底物A液、底物B液、终止液和10倍洗涤液;
其中:
所述的试剂组分及其配比如下:
(1)样品处理A液的配制:称取Na2B4O7·10H2O 13.3g,H3BO3 16.08g,NaCl 8.5g,ddH2O 800mL,调pH至8.4后用蒸馏水定容至1000mL;在121℃高压蒸汽下灭菌30分钟后分装,置4℃贮存;
(2)样品处理B液的配制:称取Na2B4O7·10H2O 13.3g,H3BO3 16.08g,NaCl 8.5g,ddH2O 800mL,调pH值为8.4后用蒸馏水定容至1000mL;在121℃高压蒸汽下灭菌30分钟后加入5g N-乙酰-L-半胱氨酸,5mL NP-40,混匀后分装,置4℃贮存;
(3)阳性对照的配制:将含病毒尿囊液冻融3次后,按终浓度0.8%的甲醛缓慢加入甲醛溶液,充分混合均匀,37℃灭活24小时,每隔6小时振摇1次;加入0.02%NaN3防腐,并作为阳性对照样品分装成0.5mL/管,置4℃下保存;
(4)阴性对照的配制:收取SPF鸡胚尿囊液,4℃,12000r/min离心30min后加入0.02%NaN3防腐。分装成0.5mL/管,置4℃下保存;
(5)底物A液:0.006%H2O2缓冲液;
(6)底物B液:取Na2HPO4·12H2O 14.2g,柠檬酸10.5g,用ddH2O定容至500m配成0.1mL磷酸盐柠檬酸缓冲液,pH5.0;按终浓度为20mg/L添加联苯二胺;
(7)终止液:浓度为40%氢氟酸溶液625μL,用ddH2O定容至100mL;
(8)10倍洗涤液:NaCl 80g,KCl 2g,Na2HPO4·12H2O 29g,KH2PO4 2g,Tween-20 5mL,用ddH2O定容至1000mL,pH7.4。
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