[发明专利]猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪圆环病毒2型(PCV2)ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于所述检测试剂盒包含有：预包被猪圆环病毒2型核衣壳蛋白(PCV2-Cap)单克隆抗体和猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的酶标板、封闭液、样品稀释液、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液，其中所述的核衣壳蛋白是纯化的形成病毒样颗粒的Cap蛋白。

2.权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于所述PCV2-Cap蛋白已自我组装形成病毒样颗粒，并通过CsCl密度梯度离心纯化获得。

3.权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于所述的PCV2-Cap蛋白通过如下方法制备：提取猪圆环病毒2型基因组，通过特异性引物扩增PCV2-Cap基因片段，利用Bac-to-Bac系统构建能表达PCV2-Cap基因的重组杆状病毒，将所述重组杆状病毒感染Sf9细胞，收获表达的Cap蛋白，通过CsCl密度梯度离心纯化后作为包被用PCV2-Cap蛋白抗原。

4.权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于所述的特异性引物是：上游引物1：5’-TCTGGATCCATGACGTATCCAAGGAGGCG-3’，下游引物1：5’-GCGAAGCTTTAAGGGTTAAGTGGGGGGTC-3’，上游引物2：5’-TCTCTCGAGATGACGTATCCAAGGAGGCG-3’下游引物2：5’-GCGGGTACCTAAGGGTTAAGTGGGGGGTC-3’。

5.权利要求1-4任一项所述的检测试剂盒，其特征在于酶标板预先包被PCV2-cap蛋白单克隆抗体，包被缓冲液是0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液，1升溶液中含1.59g Na₂CO₃，2.93g NaHCO₃，包被量为每孔0.1-1ug；封闭液为质量浓度是1-10％的牛血清白蛋白BSA或脱脂牛奶；封闭完再包被纯化的PCV2-Cap蛋白，包被量为每孔0.1-1ug；样品稀释液为含有质量浓度0.1-10％牛血清白蛋白BSA和含有质量浓度0.01-0.05％NaN₃的0.01mol/L及pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)；酶结合物为辣根过氧化物酶(HRP)-小鼠抗猪IgG单抗酶结合物；浓缩洗涤液为含体积浓度0.05％吐温-20的0.01mol/L及pH7.2-7.4的PBS；酶底物A溶液为3，3’-5，5’-四甲基联苯胺溶液(TMB)，酶底物B溶液为双氧水溶液；终止液为1mol/L H₂SO₄溶液。

6.权利要求1-4任一项所述的检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包含阳性对照和阴性对照。

7.制备如权利要求1-4任一项所述的试剂盒的方法，其特征在于所述抗原酶标板制备方法是先包被猪圆环病毒2型核衣壳蛋白(PCV2-Cap)单克隆抗体，再结合纯化的猪圆环病毒2型核衣壳蛋白(PCV2-Cap)。