[发明专利]猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体涉及一种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是引发断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，该病主要以患畜生长缓慢、进行性消瘦和多系统病例损伤为特征。除了引发PMWS外，PCV2还与仔猪先天性震颤、猪皮炎肾炎综合征、猪呼吸道综合征(PDNS)、母猪繁殖障碍等疾病相关。自1996年在加拿大首次发现PMWS以来，PCV2感染引起的相关疾病已经在全世界广泛存在。随着我国养猪业受到PCV2感染的危害日益严峻，研制PCV2血清抗体检测试剂盒的临床需求迫切。PCV基因组由一条共价闭合环状单股DNA构成，包含两个大的开放阅读框架ORF1和ORF2，分别编码病毒蛋白复制酶(Rep)和病毒衣壳蛋白(Cap)。Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白，含有4个抗原表位，具有较好的免疫原性和抗原性，是检测该病毒特异性抗体的理想靶抗原。由于该病毒在体外培养不产生细胞病变，病毒繁殖能力低，难于获得高产量的病毒抗原用于诊断目的。而昆虫杆状病毒表达系统以其表达外源蛋白产量高、免疫活性好、产物易纯化、反应背景低等优点，在多种动物疫病诊断中得到应用。检测PCV2的衣壳蛋白抗体可以反映PCV2的抗体水平，对猪群PCV2抗体水平进行监测，可确切了解猪体免疫水平或感染状况，制定最适免疫程序或淘汰选育，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大经济损失。

目前，国内外采用的PCV2检测技术主要有：病毒分离培养，间接免疫荧光，免疫酶单层实验(IMPA)，原位杂交(ISH)，聚合酶链式反应(PCR)等等。上述技术和方法虽然可以检测PCV2或抗体水平，在实践中也取得一定的效果。但均存在试验操作复杂，耗时长，需要特定的专业技能和仪器设备等，成品昂贵等缺点，不易在基层单位普及。中国专利公开号为CN1584597A的专利申请公开了一种猪圆环病毒2型抗原或抗体ELISA检测试剂盒。上述专利抗体检测试剂盒所用检测板包被的抗原为原核表达的蛋白，且二抗为羊抗猪多克隆抗体。本发明采用双单抗结合技术检测抗体，特异性更强，灵敏度更高。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪圆环病毒2型(PCV2)ELISA抗体检测试剂盒，本发明采用单克隆抗体包被法间接包被基因工程抗原制备反应板，进而组成用间接酶联免疫吸附实验检测猪圆环病毒2型抗体的试剂盒，本试剂盒除了具有普通ELISA试剂盒的优点外，还弥补了由于抗原问题而导致的灵敏度低的缺点，从而提高检测的灵敏度和特异性。

本发明的技术方案为：

一种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒，所述检测试剂盒包含有：预包被猪圆环病毒2型核衣壳蛋白(PCV2-Cap)单克隆抗体和猪圆环病毒2型核衣壳蛋白(PCV2-Cap)的酶标板、封闭液、样品稀释液、阳性对照、阴性对照、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液，酶标板预先包被PCV2-cap蛋白单克隆抗体，包被缓冲液0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液，1升溶液中含1.59g Na₂CO₃，2.93g NaHCO₃，包被量为每孔0.1-1ug；封闭液为质量浓度是1-10％的BSA或脱脂牛奶；封闭完再包被PCV2-cap蛋白，包被量为每孔0.1-1ug；样品稀释液为含有质量浓度0.1-10％牛血清白蛋白BSA和含有质量浓度0.01-0.05％NaN₃的0.01mol/L及pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)；酶结合物为辣根过氧化物酶-小鼠抗猪IgG酶结合物；浓缩洗涤液为含体积浓度0.05％吐温-20的0.01mol/L及pH7.2-7.4的PBS；酶底物A溶液为3，3’-5，5’-四甲基联苯胺溶液，酶底物B溶液为双氧水溶液；终止液为1mol/L H₂SO₄溶液，阳性对照、阴性对照放置在盒内。

辣根过氧化物酶标记的是小鼠抗猪IgG单克隆抗体。