[发明专利]基于青霉烯酸硫醇汞盐的全抗原制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化工技术领域的汞盐及其全抗原的制备方法，具体是一种基于青霉烯酸硫醇汞盐的全抗原制备方法。

背景技术

重金属离子是有毒的，持久的环境污染物。在自然环境中，特别是水体和土壤中，残留的重金属离子可以直接或者间接的进入人体，与人体内的蛋白质或功能性酶发生不可逆转的强烈作用，对人类的健康构成严重的威胁。因此，对环境中的重金属的检测和监控是非常必要。现在比较常用的重金属检测方法是仪器分析法，例如原子吸收光谱法(atomic absorption spectroscopy，AAS)，电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)，电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)，离子色谱法等。仪器分析方法比较准确，但是也存在耗时长，成本高，前处理复杂，处理通量小等缺点。

重金属离子的免疫学检测方法是一种基于具有亲和性和特异性的“抗原-抗体”反应的分析方法。因分子量小且免疫原性弱，重金属离子不能直接诱导动物产生抗体，因此需要将重金属离子以一定方式与蛋白质连接形成重金属离子全抗原，利用制备出的全抗原诱导动物产生针对重金属离子特异的抗体。免疫学方法具有快速，准确，处理通量大，前处理简单，成本低等特点，国内外已有用免疫学方法检测重金属离子的报道。重金属离子的免疫学方法的核心在于制备出高度特异的单抗隆抗体，而能否制备出特异的抗体的关键又在于重金属离子半抗原的制备。目前，国内外研究机构在制备重金属离子半抗原时使用的螯合剂主要是乙二胺四乙酸(EDTA)，二乙烯三胺五乙酸(DPTA)，乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)，或类似的衍生物作为偶联剂，以一定比例与金属离子形成笼形结构的络合物。

现有技术中免疫学方法制备抗体的缺点主要有：1、免疫系统针对应答的是包含金属键在内的笼形结构，因此金属在抗原-抗体反应中不再起关键作用，起决定作用的是复合物的形状而不是与抗原结合点直接的物理接触。Wylie，D.E.等在《Proc.Natl.Acad.Sci.USA》(美国科学院院刊)1992年第89期4104-4108页发表了题为《Monoclonal antibodies specific for mercuric ions》(针对汞离子特异的单克隆抗体)一文，文中提及针对金属络合物或者含配位金属的蛋白特异的抗体将会与表位具有与诱导抗体产生的抗原相同构型的金属络合物结合，也就是说，这种抗体与其他金属有交叉反应性，所以这种特异性针对特定金属的特异性不强；2、络合物不稳定，汞离子在动物体内会被功能性酶剥夺，降低了免疫原性，造成动物中毒甚至死亡。因此，国内外还没有通过使用螯合剂制备出汞离子单克隆抗体的例子。有研究者使用谷胱甘肽作为偶联剂(D.E.Wylie，L.D.Carson，R.Carlson，F.W.Wagner，S.M.Schuster，Anal.Biochem.194(1991)381)，连接汞离子和蛋白质，这种方法改进了螯合剂作为偶联剂的缺点，汞离子与谷胱甘肽的硫醇基通过共价键连接，在动物体内不会解离，但是也有缺点：谷胱甘肽作为偶联剂，免疫原性过低，产生的抗体效价很低。

因此，本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中制备的汞离子抗原特异性不强，抗原安全性差以及免疫原性过低的缺点，提供一种新的抗原及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基于青霉烯酸硫醇汞盐的全抗原制备方法。本发明的制备方法反应体系简单，制备过程简单；制备得到青霉烯酸硫醇汞盐性质稳定，可作为汞离子的半抗原。

本发明是通过以下技术方案实现的，

本发明涉及一种青霉烯酸硫醇汞盐，具体结构如下：

其中，R₁为C₆H₅-CH₂-，R₂为Na、K或H。

本发明还涉及所述青霉烯酸硫醇汞盐的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，在咪唑的存在下，将青霉素G钠盐或青霉素G钾盐与氯化汞反应；

步骤二，纯化反应产物，制备得到青霉烯酸硫醇汞盐。

步骤一中，所述反应的pH为6.0～9.0。

步骤一中，所述反应在60℃下进行。

步骤一中，所述反应的时间为2小时。

步骤二中，所述纯化为：10000rpm离心纯化反应产物。

步骤二中，所述纯化为：10000rpm离心5min纯化反应产物。

本发明涉及一种青霉烯酸硫醇汞盐的应用，将青霉烯酸硫醇汞盐作为汞离子半抗原。