[发明专利]辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人兽共患病原菌，可侵害各年龄阶段的猪，病猪通常以败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结炎为主要特征。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原(CPS)可将其分为35个血清型，其中能引起人和动物发病的致病性猪链球菌血清型主要是1型(SS1)、2型(SS2)、7型(SS7)和9型(SS9)。不同血清型分布不同，加拿大以2、1/2、3、4、8型流行最广；意大利以2型流行最广，其次是1、9、1/2、3、7、4、8型；荷兰法国以2和9型为主；巴西以2型流行最广，其次14、9、7、11、8、1、1/2、3、5、6、10型。近年来这些高致病性血清型菌株的流行呈上升趋势，造成了巨大的经济损失，并引起多例人的感染和死亡。SS2和SS7都是能够同时感染人和猪的病原菌。但目前对于这两类病原菌血清型鉴别的报道还相对较少。

近些年国外学者对SS2的鉴定研究主要利用限制性片段长度多态性分析、免疫色谱法、间接荧光抗体试验、ELISA、多位点酶电泳法、脉冲场凝胶电泳法、随机扩增核酸片段多态性分析以及原位分子杂交等研究方法，这些方法作为科学研究的方法是十分有效和必要的，但作为SS2的快速诊断就显得无力了。对于SS7亚型的研究，1999年，Smith HE等人，根据SS7CPS基因的特异性，设计引物并建立了SS7型PCR诊断方法；2003年，Okwumabua O等人，根据GDH基因设计一条可扩增出688bp基因片段长度的引物，可用来检测各种血清型的SS；同时根据SS各血清型间CPS基因的差异，建立了1/2、1、2、7、9型的多重PCR鉴别诊断方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。

本发明提供的辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

所述专用引物可用于制备辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒，所述专用引物。所述试剂盒还可包括PCR扩增的常规试剂，琼脂糖凝胶电泳的常规试剂等。

所述专用引物或所述试剂盒可用于辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型。

本发明还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法I，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌2型且为候选的非猪链球菌7型。

本发明还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法II，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果应用所述引物对甲得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果应用所述引物对甲没有得到211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌2型；如果应用所述引物对乙得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果应用所述引物对乙没有得到347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。

本发明还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法III，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；所述待测细菌为猪链球菌2型或猪链球菌7型；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型。

本发明还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法IV，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；所述待测细菌为猪链球菌2型或猪链球菌7型；