[发明专利]一个识别肿瘤起始细胞的抗体和抗原及其应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤起始细胞鉴别和/或治疗靶分子的寻找方法，该方法包括用复发肝癌来源、富含肿瘤起始细胞的Hep-12细胞免疫动物的步骤，并利用Hep-12细胞和Hep-11细胞作为筛选细胞对。

2.电压依赖性钙离子通道蛋白α2δ亚基1(calcium-channel，voltage-dependent，α2/δsubunit 1，简称CACNA2D1，Genebank序列号NM_000722.2CACNA2D1)是肿瘤起始细胞分离、鉴定和治疗的一个靶分子，可用于诊断试剂和肿瘤治疗药物的制备和筛选。

3.根据权利要求书2，CACNA2D1基因作为肿瘤起始细胞的鉴别的分子是指该基因阳性的肿瘤细胞具有肿瘤起始细胞的特性(亦可称为肿瘤干细胞)，可以在免疫缺陷动物体内形成肿瘤。

4.一种通过检测CACNA2D1基因的表达(mRNA或/和蛋白水平)的肿瘤诊断试剂制备和应用的方法。

5.权利要求书4中对CACNA2D1基因mRNA表达的检测试剂和应用是指包括但不限于设计针对该基因特异引物进行逆转录PCR(RT-PCR)为基础的各种PCR检测试剂的制备。

6.权利要求书4中对CACNA2D1基因蛋白表达的检测试剂和应用是指能特异结合CACNA2D1分子的抗体或抗原结合片段、短肽或其它小分子化合物，它们可以单独或与荧光素、同位素交联或经其他基团修饰、标记以组成适用不同检测方法诸如酶联免疫吸附、放免测定、体内显像、免疫组化、免疫细胞化学、流式细胞分析以及Western杂交等的试剂盒用于肿瘤的检测和预后判断。

7.根据权利要求书2，CACNA2D1作为肿瘤治疗的靶分子是指具备降低该基因表达或/和蛋白活性、或靶向该分子后引起细胞毒性反应特征的药物(如抗体或抗原结合片段、单链或双链寡聚核苷酸、核酸、短肽或各种小分子化合物)，单独或经过修饰，或借助于适当的载体、或与其它治疗药物一起应用于人体治疗肿瘤。

8.一种肿瘤治疗药物制备和筛选的方法，该方法涉及利用CACNA2D1作为靶标，研制和筛选具有降低该基因表达或/和蛋白活性、或靶向该分子后引起细胞毒性反应的诸如抗体或抗原结合片段、单链或双链寡聚核苷酸、核酸、短肽或各种小分子化合物药物。

9.根据权利要求书8所述，针对CACNA2D1基因用于RNA干扰的药物为针对该基因核苷酸顺序(序列7或序列8)，人工指合成的对应单链RNA或含有这些中心顺序迴文结构的双链、转录后可自身形成具发卡结构RNA的DNA顺序重组在RNA干扰的各种载体，供导入CACNA2D1基因阳性的肿瘤细胞，以应用于人体治疗肿瘤。

10.权利要求6、7和8中抗体的特征为用各种免疫方法获得的不同种属、多克隆、单克隆或基因工程方法获得的各种免疫球蛋白或抗原结合片段，或其衍生物具备特异结合CACNA2D1分子能力。

11.根据权利要求10，一个用于肿瘤诊断和治疗、特异针对CACNA2D1的单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

(i)重链，其包含重链可变区CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列分别为序列1、2、3；或

(ii)轻链，其包含轻链可变区CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列分别为序列4、5、6所述的氨基酸序列；或

(iii)上述(i)和(ii)两者。

12.根据权利要求10所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的杂交瘤(保藏编号为CGMCC No.416)所产生的单克隆抗体。

13.用于诊断肿瘤的试剂盒制备和应用，其包含权利要求11和12中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

14.用于肿瘤治疗药物的制备和应用，其包含权利要求11和12中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

15.分离的核酸分子，其包含编码根据权利要求11和12中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列的核苷酸。

16.上述权利要求中，其用于诊断或治疗肿瘤，优选所述肿瘤为肝癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌或其他高表达CACNA2D1基因的肿瘤。