[发明专利]复制缺陷甲病毒表达载体系统及疫苗制备方法

权利要求书

1.复制缺陷型甲病毒表达载体系统，包括甲病毒复制子系统和甲病毒辅助包装系统，甲病毒复制子系统的复制子含有至少一个启动子和去除了编码结构蛋白序列的甲病毒核酸序列，甲病毒辅助包装系统的结构蛋白辅助子含有编码甲病毒结构蛋白序列的反义核酸序列，反义核酸序列的5’端连接有基因复制调控开关核酸序列，基因复制调控开关核酸序列的5’端连接有基因复制启动子。

2.根据权利要求1所述的复制缺陷甲病毒表达载体系统，其特征在于：结构蛋白复辅助子的甲病毒结构蛋白序列的反义核酸序列和基因复制调控开关核酸序列之间设有亚基因组增强子。

3.根据权利要求1所述的复制缺陷甲病毒表达载体系统，其特征在于：甲病毒复制子系统的复制子和甲病毒辅助包装系统的结构蛋白复辅助子的核酸序列连接在不同的质粒中。

4.根据权利要求1所述的复制缺陷型甲病毒表达载体系统，其特征在于：基因复制调控开关为动物、植物、细菌、病毒的抑制子。

5.根据权利要求4所述的复制缺陷甲病毒表达载体系统，其特征在于：基因复制调控开关为四环素抑制子。

6.根据权利要求1所述的复制缺陷甲病毒表达载体系统，其特征在于：甲病毒为基孔肯雅病毒。

7.一种疫苗制备方法，包括以下步骤：

1)    将病菌的免疫原序列插入到权利要求1或3所述的甲病毒复制子系统的复制子，取代原甲病毒核酸序列的结构蛋白序列，得到免疫原复制子；

2)    将权利要求1或3所述的甲病毒辅助包装系统的结构蛋白辅助子转染表达基因复制调控开关核酸序列抑制蛋白的细胞，得到结构蛋白辅助细胞；

3)    在结构蛋白辅助细胞的培养基中加入与基因复制调控开关核酸序列抑制蛋白结合的底物，解除细胞对结构蛋白表达的抑制；

4)    使用免疫原复制子转染解除结构蛋白表达抑制的辅助细胞，包装得到大量具有感染力的重组甲病毒；

5)    使用重组甲病毒感染正常细胞，得到大量免疫原，进而使用免疫原制备得到疫苗。

8.根据权利要求7所述的疫苗制备方法，其特征在于：免疫原序列为肠道病毒亚单位蛋白序列或整个肠道病毒结构基因。

9.根据权利要求8所述的疫苗制备方法，其特征在于：肠道病毒为EV71、cosA16、cosB3、脊髓灰质炎病毒。