[发明专利]一种格列风内酯单体的分离纯化方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药化学技术领域，涉及一种格列风内酯单体的分离纯化方法，尤其是一种采用微波提取、酸碱纯化、氧化铝柱层析以及重结晶结合的方法制备格列风内酯。

背景技术：

天葵Semiaquilegiaadoxoides(DC.)Makino是毛莨科天葵属植物，为多年生草本，块根肉质，略呈圆柱形或纺锤形，外皮棕黑色；茎纤细，被白色细柔毛，基生叶为三出复叶，具长柄，3深裂；茎生叶较小，互生，单岐或二岐聚伞花序，花白色，常带淡紫色；萼片5，花瓣状；花瓣5，匙形，雄蕊8-14；雌蕊具3-4心皮，蓇葖果2-4；生长于丘陵或低山林下、草丛、沟边等阴湿处。广泛分布于河南、江苏、湖北、福建、湖南等地。

天葵子味甘、苦，性寒，有小毒；具清热解毒，消肿散结之功效；用于瘰疠、臃肿、疔疮、跌打损伤、毒蛇咬伤等症。现代药理实验表明，天葵子对金黄色葡萄球菌等有抑制作用；临床上用天葵子或其复方治疗急性软组织损伤及骨关节结核、急性乳腺炎、子宫肌瘤、原发性肝癌、胃癌等。

天葵子主要含生物碱、内酯、香豆素、酚酸及酚苷类化合物，格列风内酯(Griffonilide)是天葵子的主要有效成分之一，其分子式为C₈H₈O₄，分子量为168.04，为无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮，难溶于氯仿。药理研究表明其具有显著的抗炎活性，对炎症的抑制率高达64％。

格列风内酯的提取技术主要包括：(1)以天葵子鲜品或干品为原料，切碎，用提取溶媒(水、甲醇、乙醇、丙酮中的一种或与水任意比例混合溶剂)行提取，所得提取液除去溶剂后得到天葵提取物，纯化步骤为用适量水分散，非极性溶剂除去色素，该非极性溶剂为正己烷、环己烷、石油醚、乙醚、二氯甲烷或三氯甲烷，用溶剂萃取，萃取液浓缩后除去该萃取用溶剂，得天葵提取物纯化物；或用适量甲醇溶解，上大孔吸附树脂，先用蒸馏水洗脱，然后用20％的甲醇或乙醇溶液洗脱，再用含甲醇或乙醇20-90％的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，得天葵提取物纯化物；或用适量粗硅胶或氧化铝拌样，进行柱层析，用有机溶剂洗脱，除色素，该方法所得提取物为混合物，不能满足市场对高含量有效活性成分单体的需求；(2)以天葵子药材粗粉为原料，5倍量95％乙醇加热回流提取3次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，得乙醇浸膏，取浸膏悬浮于水中，用醋酸乙酯和正丁醇萃取，蒸干溶剂，硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇系统梯度洗脱，氯仿-甲醇(100∶8)洗脱流分浓缩析晶，结晶漏斗抽滤，甲醇重结晶得到格列风内酯，该方法生产时间长，填充物难以回收，成本较高。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种格列风内酯单体的分离纯化方法。该方法提取率高、制备过程简单，易于批量生产。

本发明是采用以下技术方案实现的：

一种格列风内酯单体的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取：取天葵子药材粉碎成粗粉，加60-85％乙醇微波提取10-60分钟，提取2-5次，合并提取液，浓缩得浸膏；

(2)碱溶酸沉：将上述浸膏加碱水分散，搅拌均匀，过滤，滤液再加酸水调至pH4-5，用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后得到天葵子总内酯浸膏；

(3)氧化铝柱层析：将上述浓缩液与1-1.5倍150-200目中性氧化铝拌混均匀，再用新鲜的中性氧化铝上柱，拌混氧化铝装于其上，以混合有机溶剂洗脱，收集洗脱液，回收试剂，得到格列风内酯浓缩液；

(4)重结晶：将格列风内酯浓缩液置于结晶罐中静置8-24小时使其结晶，离心使格列风内酯晶体与母液分离，用二氯甲烷-甲醇重结晶，得到纯度为95％以上的格列风内酯。

步骤(1)所述的乙醇用量为原料的10-20倍。

步骤(2)所述的碱水为氨水、氢氧化钠溶液或碳酸氢钠溶液，浓度为0.5-3％，碱水加入量为提取浸膏量的2-5倍。

步骤(2)所述的酸水为盐酸或硫酸。

步骤(3)所述的混合溶剂为正己烷-甲醇溶液或石油醚-二氯甲烷-甲醇混合溶液，所述正己烷-甲醇溶液体积比为3∶1；所述石油醚-二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱为先以石油醚-二氯甲烷(10∶1)洗脱杂质，再用二氯甲烷洗脱，最后用二氯甲烷-甲醇(4∶1)洗脱。

步骤(4)所述重结晶溶剂二氯甲烷-甲醇的体积比为10-6∶1。