[发明专利]羊奶酸奶专用发酵剂的制备方法

权利要求书

1.一种羊奶酸奶专用发酵剂的制备方法，其特征在于由下述步骤组成：

(1)乳酸菌的分离纯化

用平板划线法从商品牛奶酸奶中分离纯化保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，分离纯化的方法为：用脱脂奶粉和水配制成质量分数为12％的脱脂乳，经115℃灭菌20分钟，将商品牛奶酸奶接入灭菌后的脱脂乳中，商品牛奶酸奶接入量为12％的脱脂乳的2％，37℃下发酵至凝乳；在无菌操作条件下，分别将凝乳在MRS固体培养基和M17固体培养基上划线，MRS固体培养基放在厌氧条件下37℃培养2～3天，M17固体培养基在大气环境下37℃培养2～3天，挑选形态相同、数量最多的单个菌落，经革兰氏染色，在油镜下观察菌体特征，将具有杆菌特征的菌落在MRS固体培养基上培养，具有球菌特征的菌落在M17固体培养基上培养，直至染色镜检的视野中无杂菌为止，视为分离纯化完毕；从分离纯化的乳酸菌中筛选出2株乳酸菌，经微生物形态和生理生化鉴定，确定1株为保加利亚乳杆菌，命名为Lb-1，另1株为嗜热链球菌，命名为St-2；

(2)乳酸菌的增殖培养

取新鲜胡萝卜，洗净、切碎，加入与其等质量的蒸馏水，煮沸15分钟，用榨汁机捣碎，3层纱布过滤，制备成胡萝卜汁；取新鲜番茄，加入与其等质量的蒸馏水，煮沸15分钟，用榨汁机捣碎，3层纱布过滤，制备成番茄汁；

在MRS液体培养基中添加其体积7.5％～12.5％的胡萝卜汁、7.5％～12.5％的番茄汁以及其质量0.3％～0.7％的碳酸钙，121℃灭菌处理10分钟，在无菌条件下，加入步骤(1)中分离纯化的保加利亚乳杆菌Lb-1菌株，每毫升MRS液体培养基中接入保加利亚乳杆菌Lb-1菌株10⁶cfu，43℃增殖培养12小时；

在M17液体培养基中添加其体积7.5％～12.5％的胡萝卜汁、7.5％～12.5％的番茄汁以及其质量0.3％～0.7％的碳酸钙，121℃灭菌处理10分钟，在无菌条件下，加入步骤(1)中分离纯化的嗜热链球菌St-2菌株，每毫升M17液体培养基中接入嗜热链球菌St-2菌株10⁶cfu，43℃增殖培养12小时；

(3)乳酸菌的离心分离

将乳酸菌的增殖培养步骤(2)中保加利亚乳杆菌Lb-1菌株增殖培养后的MRS液体培养基和嗜热链球菌St-2菌株增殖培养后的M17液体培养基分别在6000转/分钟离心分离10分钟，倾去上层清液，得到含保加利亚乳杆菌Lb-1菌株的菌泥和含嗜热链球菌St-2菌株的菌泥；

(4)菌泥冷冻

将含保加利亚乳杆菌Lb-1菌株的菌泥和含嗜热链球菌St-2菌株的菌泥按质量比为1∶1混合成混合菌泥，添加冷冻保护剂，混合均匀，分装于经灭菌后的小瓶中，在-40℃的冰箱中冷冻12小时；

上述的冷冻保护剂为蔗糖、葡萄糖、脱脂乳、麦芽糊精、甘油中的任意一种或几种的混合物；使用单一冷冻保护剂时，蔗糖用量为混合菌泥质量的3％，葡萄糖用量为混合菌泥质量的3％，脱脂乳用量为混合菌泥质量的8％，麦芽糊精用量为混合菌泥质量的10％，甘油用量为混合菌泥质量的10％；使用2种组分的混合物冷冻保扩剂时，脱脂乳用量为混合菌泥质量的8％、甘油用量为混合菌泥质量的2％；使用3种组分的混合物冷冻保护剂时，脱脂乳用量为混合菌泥质量的8％、甘油用量为混合菌泥质量的2％、麦芽糊精用量为混合菌泥质量的0.5％；使用4种组分的混合物冷冻保护剂时，脱脂乳用量为混合菌泥质量的8％、甘油用量为混合菌泥质量的5％、蔗糖用量为混合菌泥质量的3％、麦芽糊精用量为混合菌泥质量的1％；

(5)混合菌泥的冷冻

将添加冷冻保护剂后的混合菌泥，分装于经灭菌后的小瓶中，在-40℃的冰箱中冷冻12小时；

(6)混合菌泥的真空冷冻干燥

将步骤(5)冷冻后的混合菌泥放入真空冷冻干燥机中，冷阱温度为-50℃、真空度为100Pa冷冻干燥12～18小时，至干燥后菌粉中水分含量小于2％，制备成羊奶酸奶专用发酵剂。