[发明专利]干扰素诱导跨膜蛋白3在制备抗乙型肝炎病毒感染药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物化学物质在基因工程、蛋白质工程和制药工程中的新用途，更具体地说就是干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)及其核苷酸编码序列在制备治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染相关性疾病药物中的应用。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染严重威胁人类健康，是导致肝炎、肝硬化和肝癌的重要诱因。全世界有3.5亿乙型肝炎病毒携带者，中国约有1.2亿HBV携带者，其中2000多万人为慢性乙肝患者，每年我国在慢性病毒性肝炎方面的直接治疗费用超过500亿人民币。HBV感染不仅给患者及其家庭造成巨大的经济和精神负担，而且给国家造成了巨大的劳动力和经济损失，乃至导致严重的就业等社会问题。

目前仍然缺乏有效的HBV治疗药物，疫苗虽然可起到一定的预防作用，但对已感染者及免疫耐受者无效。临床应用的抗HBV药物主要有干扰素以及一些核苷类似物。干扰素的治愈率有限，副作用较多，停用后通常会出现复发现象。核苷类似物如拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等是HBV DNA聚合酶的强抑制剂，能有效阻断病毒复制，但长期用药会导致病毒变异，产生耐药性，而且部分病人停药后会复发。因此，新型抗HBV药物的研制具有重大的社会和经济效益。

乙肝病毒的基因组含有四个基本阅读框架，编码四种蛋白，它们分别是表面蛋白(又称为表面抗原，HBs)、核心蛋白(核心抗原，HBc)、聚合酶和X蛋白(HBx)。乙肝病毒基因的表达受到病毒四个基本启动子和两个增强子的调控，即核心蛋白启动子/增强子II(ENII/Cp)、前表面蛋白启动子(Sp1)、表面蛋白启动子(Sp2)和X蛋白启动子/增强子(ENI/Xp)。细胞内一些转录调控因子通过结合上述调控区从而调控乙肝病毒基因的表达。由于乙肝病毒基因组复制过程存在反转录，其模板是前基因组RNA(pgRNA)，因此，乙肝病毒基因的表达，特别是由Cp/ENII启动的pgRNA的转录将直接关系到乙肝病毒能否顺利复制和增殖，其在病毒的生活史中具有中心的地位。

干扰素诱导跨膜蛋白蛋白家族分子是一类人体自身产生的蛋白，首次发现于1984年，大多数细胞里这种蛋白的表达水平较低。最近研究显示其家族分子IFITM1、IFITM2和IFITM3分子体外可显著抑制H1N1流感病毒、西尼罗河病毒和登革热病毒的感染。目前有关IFITMs蛋白分子抗乙型肝炎病毒的作用尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种IFITMs蛋白家族分子用于治疗HBV感染相关疾病中的新用途。具体说，本发明涉及IFITM3蛋白及其核苷酸编码序列在制备治疗HBV感染引起的相关疾病的药物中的应用。

本发明提供一种IFITM3蛋白的医药新用途：以IFITM3蛋白3为活性成分，配以制药可接受的载体，制成多种制剂，用以治疗和预防HBV感染及其相关疾病。

所说的制药可接受的载体包括药用稀释剂、稳定剂、赋形剂、吸收促进剂、促渗透剂、蛋白酶抑制剂、阻聚剂等，如甘氨酸、PH7.0磷酸盐缓冲液、右旋糖酐、乳糖、氯化钠、柠檬酸、明胶、注射用水、生理盐水、脂质体、胆盐、脂肪酸、皂角苷、辛酸钠、月桂酸钠、聚丙烯酸、梭链孢酸衍生物(如牛磺酸二氢梭链孢酸盐、环糊精等)、甘油、A-zone、表面活性剂、脂肪酸、胆盐、水杨酸钠、Zonula occludens toxin(ZOT)、甘胆酸钠、camostat mesilate、bacitracin、aprotinin、大豆胰酶抑制剂、非离子表面活性剂、糖、甘露醇、山梨醇、PEG、人血清白蛋白等，可同时使用其中的一种或多种。

本发明药物可制作适合于静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔给药、肺部给药、口服给药以及透皮给药用剂型，包括溶液型注射剂、冻干粉针、微球、粉末、粉雾剂、气雾剂、肠溶衣、毫微球、微乳、复乳等剂型。

根据本发明，细胞内高表达IFITM3蛋白或其突变体蛋白均可特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，IFITM3可能成为治疗及预防HBV感染相关疾病的新型生物工程药物。

本发明另一方面提供了一种编码本发明蛋白的核苷酸序列。根据本发明，将含有IFITM3表达序列标签(CDS)序列构建到pAAVMCS载体中与HBV复制载体共转染HepG2细胞，能够特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，因此含有编码IFITM3核苷酸序列的载体可能成为制备治疗及预防HBV感染相关疾病的生物工程药物。

本发明另一方面提供了一种基因治疗载体，所述构建物含有本发明上述核苷酸序列以及与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。