[发明专利]用于多重核酸测序的标签及其使用方法

权利要求书

1.一组不同长度，优选梯度长度的标签用于测序标签文库的构建和/或测序的用途，其中所述标签是一段寡聚核苷酸序列，优选是2-100bp的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的用途，其中将所述标签包含在用于扩增目的序列的PCR引物中，从而构成各自相对应的标签PCR引物，通过PCR方法引入待测序序列中，所述PCR标签引物用作PCR的5’引物，或3’引物，或者同时用作PCR的5’引物和3’引物。

3.权利要求1所述的用途，其中在所述标签PCR引物中，所述标签嵌入用于扩增目的序列的PCR引物中，或者通过或不通过连接子与用于扩增目的序列的PCR引物的5’端或3’端相连，从而构成各自相对应的标签PCR引物。

4.权利要求1所述的用途，其中将所述标签包含在标签文库的接头中，从而构成各自相对应的标签接头，所述标签接头用作标签文库的5’接头，3’接头，或者同时用作标签文库的5’接头和3’接头。

5.权利要求1所述的用途，其中所述标签插入接头中，或通过或不通过连接子连接在接头的末端，优选地不通过连接子连接在接头的末端，从而构成自相对应的标签接头。

6.权利要求1所述的用途，其中所述标签构成标签PCR引物和标签接头，同时用于测序标签文库的构建和/或测序。

7.一组不同长度，优选梯度长度的标签，其用于测序标签文库的构建和/或测序。

8.一组梯度标签，所述一组梯度标签包括如下或由如下组成：表1所示的6个梯度标签或者与其相差1个碱基的梯度标签中的至少2个，或至少3个，或至少4个，或至少5个，或全部6个，

所述一组梯度标签优选地至少包括表1所示的6个梯度标签中的Index1和Index2，或Index3和Index4，或Index5和Index6，或者他们任何两个或多个的组合。

9.权利要求8所述的梯度标签，其中所述相差1个碱基包括对表1所示的6个梯度标签的序列中1个碱基的取代、添加或缺失。

10.权利要求8或9所述的梯度标签用于测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的构建和/或测序的用途，其中所述梯度标签包含在用于测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的接头2的5’末端中，从而构成各自相对应的梯度标签接头2，其用作测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的3’接头。

11.权利要求10所述的用途，所述梯度标签包含在接头2的5’末端中，包括所述梯度标签通过或不通过连接子与接头2的5’末端相连，或者插入接头2的5’末端中，优选的是不通过连接子与接头2的5’末端相连。

12.使用权利要求8或9所述的梯度标签构建的测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库。

13.包含权利要求8所述的梯度标签的一组梯度标签接头2，其在5’末端包含权利要求1所述的梯度标签，并且优选地用作测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的3’接头，所述一组梯度标签接头2包括如下或由如下组成：表1所示的6个梯度标签接头2或者与其中包含的梯度标签序列相差1个碱基的接头中的至少2个，或至少3个，或至少4个，或至少5个，或全部6个，

所述一组梯度标签接头2优选地至少包括表1所示的6个梯度标签接头2中的Index1 adapter2F/R和Index2 adapter2F/R，或Index3adapter2F/R和Index4 adapter2F/R，或Index5 adapter2F/R和Index6adapter2F/R，或者他们任何两个或多个的组合。

14.权利要求13所述的梯度标签接头2，其中所述相差1个碱基包括对梯度标签序列中1个碱基的取代、添加或缺失。

15.权利要求13或14所述的梯度标签接头2用于测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的构建和/或测序的用途，所述梯度标签接头2用作测序标签文库，特别是Illumina/Solexa测序标签文库的3’接头。