[发明专利]姜脱病毒培养与脱毒苗繁殖、生根同步化培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及药食两用植物姜的脱病毒培养与脱毒苗繁殖、生根同步化培养方法。

背景技术

姜（Zingiber officinale Rosc.）为姜科姜属多年生草本植物，是常用的药食两用经济作物。其根茎也称生姜，既是人们日常生活中必不可少的调味品和蔬菜，也是传统中医常用的大宗药材，具有具有解表散寒，温中止呕，化痰止咳的功效，常用于治疗感冒风寒，呕吐，痰饮，喘咳，胀满，泄泻等疾病；还可用于解半夏、天南星及鱼蟹、鸟兽肉之毒。研究表明生姜所含的姜辣素能促进胃液分泌及肠管蠕动，所以有健胃，助消化之效；生姜所含姜酮，姜烯等成分有镇呕功效，温中止呕，能治胃寒呕吐，因此具有止呕作用。除此之外，生姜还具有抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、降低胆固醇等作用。

姜一般不开花或很少开花，生产上通常通过种姜（姜根茎）进行无性繁殖。但在繁殖过程中容易受到各种病毒的侵染，造成姜的品质退化，抗性下降，产量降低。采用热处理结合茎尖分生组织培养法可有效除去侵染姜的各种病毒，获得高品质的脱毒苗；采用繁殖与生根同步化培养方法可有效缩短优良品种选育的时间，提高良种选育的数量和质量，并节省大量的人力物力。

发明内容

本发明的目的是提供一种既能提高姜的品质又可以快速繁殖出大量适合移栽的优良脱毒姜苗、以满足生产需要的姜脱病毒培养和脱毒苗组织培养的技术。

本发明提供的姜脱病毒培养与脱毒苗繁殖、生根同步化培养方法包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取姜根茎萌发至1-2cm长的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15-30min、0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分；其中每升0.1%升汞中加2-3滴吐温-20；

（2）热处理结合茎尖组织培养：将步骤（1）中得到的外植体在60℃下处理15-30 min，置于解剖镜下，剥取0.2-0.3 mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中培养60天得到脱病毒苗；培养温度为23-27℃，光照强度为1500lx，光照时间为14-16小时/天；其中MS培养基中含有2.0 mg/L 的6-BA、0.2 mg/L 的IAA、30g/L的糖和3.4 g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（3）繁殖与生根同步化培养：将步骤（2）中得到的脱病毒苗置于MS培养基中培养30天得到试管苗，培养温度为23-27℃，光照强度为1500lx，光照时间为14-16小时/天；其中MS培养基中含有2.5 mg/L的 6-BA、0.4 mg/L 的NAA、0.3 mg/L的ABT、30g/L的糖和3.4 g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（4）炼苗与移栽：将步骤（3）中得到的试管苗取出，洗净根部培养基，分成带2-3个根的单株苗，再放入瓶内，加入水，用瓶盖掩盖瓶口，炼苗2-3天后移栽苗床；所述苗床的营养土重量配比为：珍珠岩: 碱性营养土: 酸性营养土=1: 1: 1，试管苗在苗床生长一个月后移栽大田。如于3-4月移栽，应每天（早8点到晚6点）喷雾3-5次，每次10min，早晚覆盖塑料薄膜；如于5-6月移栽，应每2h喷雾15min，白天加盖遮阳网。最佳的移栽时间为每年的5月中旬到6月初，移栽天气最好为阴天。

本发明具有以下优点：

（1）侵染姜的主要病毒是烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒，烟草花叶病毒在90～93°C的高温下处理10 min可将该病毒钝化，但是这一温度对细胞的杀伤力也比较大，一般植物细胞无法耐受如此高的温度。而黄瓜花叶病毒钝化温度是60～70℃，在此温度下处理10 min即可将病毒钝化，且短时间暴露在此温度中不会对植物细胞造成过大的伤害。病毒在植株体内一般是通过维管系统移动，但分生组织内不存在维管系统，且分生组织的细胞分生能力强，代谢活性高，可竞争抑制病毒的复制。热处理结合茎尖分生组织培养可以有效地除去姜携带的各种病毒。

（2）在MS培养基上添加适当浓度（2.0-3.0 mg/L）的植物分裂激素6-苄基腺嘌呤（6-BA）可促进丛生芽的分化；添加低浓度（0.1-0.2 mg/L）的生长激素α-萘乙酸（NAA）可促进植物的生长。在MS培养基上添加不同浓度的两种激素可以获得大量的丛生芽，且可诱导长出少量的根，但根较细长，脆弱、颜色泛白，移栽后成活率很低；