[发明专利]一种小鼠白内障模型及其构建方法

权利要求书

1.一种小鼠白内障模型构建方法，包括以下步骤：

(1)回交：

(a)取BALB/cAnSlac小鼠与ICR小鼠杂交，获得子代，筛选出白内障突变小鼠；

(b)以白内障突变小鼠为父本，以BALB/cAnSlac品系为母本杂交得到F1代；F1代挑选白内障症状小鼠与BALB/cAnSlac回交至少10代，培育成携带白内障症状的纯系小鼠BALB/cAnSlac-Crygc-del；

(2)遗传学鉴定：

利用STR位点进行基因组扫描，及cDNA测序技术对纯系小鼠BALB/cAnSlac-Crygc-del进行遗传学鉴定。

2.依据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)遗传学鉴定具体为：

(a)从NCBI(National Center for Biotechnology Information)选取平均覆盖19条常染色体的共44个STR位点，STR位点在C3H/HeJSlac和BALB/cAnSlac两个品系中的片断长度互不相同，并相差4个bp以上，对这些位点进行引物设计，鉴定回交小鼠的基因组DNA；

(b)从NCBI(National Center for Biotechnology Information)上进一步选取精细定位所用遗传位标，STR位点在C3H/HeJSlac和BALB/cAnSlac两个品系中的片断长度互不相同，并相差4个bp以上，然后对这些STR位点进行引物设计，通过全基因组扫描与单倍型分析，将白内障相关基因精细定位到小的区段内；

(c)挑选区段内晶状体蛋白基因Cryg作为候选基因，针对其cDNA序列设计合适的引物，以野生型、白内障杂合型、纯合型为模板，进行PCR扩增，将PCR产物测序；

(d)对Cryg突变位点设计一对荧光引物，以野生型、白内障杂合型、纯合型为模板，进行扩增，验证Cryg突变位点，其中：

上游引物5’→3’CAGAATGCGGCTGTATGAGA

下游引物5’→3’GAGCCCGCCTTAGCATCTAC；

(e)BALB/cAnSlac-Crygc-del纯系的突变基因为Crygc亚基第三个外显子1个碱基缺失突变。

3.依据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(a)中选取的STR位点如下表所示：

4.依据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(b)中选取的STR位点如下表所示：

5.依据权利要求1所述的方法，其特征在于：其中突变的Crygc基因缺乏编码第三个外显子最后15个氨基酸。

6.依据权利要求1所述的方法，其特征在于：其中步骤(a)中所述突变小鼠显示先天性白内障，步骤(b)中F1代为杂合子突变小鼠，其表现为与步骤(a)中所述突变小鼠类似的核型和放射状白内障，步骤(b)中所述纯合子突变小鼠刚出生就形成完全白内障。

7.依据权利要求6所述的方法，其特征在于：杂合子突变小鼠的晶状体变小，纯合子突变小鼠晶状体空泡化。

8.依据权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所述突变纯系小鼠是称为BALB/cAnSlac-Crygc-del的品系。

9.一种小鼠白内障模型，其特征在于经由以下步骤获得：

(a)取BALB/cAnSlac小鼠与ICR小鼠杂交，获得子代，筛选出白内障突变小鼠；

(b)以白内障突变小鼠为父本，以BALB/cAnSlac品系为母本杂交得到F1代；F1代挑选白内障症状小鼠与BALB/cAnSlac回交至少10代，培育成携带白内障症状的纯系小鼠，即获得小鼠白内障模型。

10.根据权利要求9所述的小鼠白内障模型，其特征在于：所述模型为小鼠白内障BALB/cAnSlac-Crygc-del模型，突变纯系小鼠BALB/cAnSlac-Crygc-del的突变基因为Crygc，且Crygc基因缺乏编码第三个外显子最后15个氨基酸。