[发明专利]一种可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法无效
申请号: | 201110051591.1 | 申请日: | 2011-03-01 |
公开(公告)号: | CN102120029A | 公开(公告)日: | 2011-07-13 |
发明(设计)人: | 谭光宏;黄风迎;黎岳南;郭峻丽;黄用豪;王华 | 申请(专利权)人: | 海南医学院 |
主分类号: | A61K39/39 | 分类号: | A61K39/39;A61K39/00;A61K47/36;A61K9/14;A61P35/00;A61P35/04 |
代理公司: | 海口兴南知识产权事务有限公司 46002 | 代理人: | 戴巨龙 |
地址: | 571101*** | 国省代码: | 海南;66 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 可以 诱导 肿瘤 免疫 反应 海藻 酸盐微 颗粒 制备 方法 | ||
1.一种可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)、构建MIP-3α真核表达质粒并将其转染肿瘤细胞;
(2)、通过G418筛选获得可以稳定表达MIP-3α的肿瘤细胞株,称为MIP-3α肿瘤细胞;
(3)、培养大肠杆菌,将大肠杆菌溶于质量浓度为1.5%的海藻酸盐溶液,获得细菌海藻酸盐溶液;
(4)、将步骤(2)的MIP-3α肿瘤细胞混匀于经高温高压消毒后的步骤(3)的细菌海藻酸盐溶液中,此时获得“MIP-3α肿瘤细胞细菌海藻酸盐溶液”;
(5)、通过雾化器将步骤(4)的“MIP-3α肿瘤细胞细菌海藻酸盐溶液”进行雾化,并将雾化颗粒喷入250mMol/L的氯化钙溶液中,经过孔径大小不同纱网过滤后获得直径50-300μm并且可以注射的“MIP-3α肿瘤细胞细菌海藻酸盐微颗粒”。
2.如权利要求1所述的可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(3)具体为:将海藻酸盐按1.5g/100ml的比例溶于纯水,配制成质量浓度为1.5%的海藻酸盐溶液;同时挑取在平板上培养的大肠杆菌DH5α培养12~14小时,第二天在8000rpm、离心1分钟条件下获得大肠杆菌,用PBS或生理盐水清洗1-2次后按1×107/ml比例将大肠杆菌加入质量浓度为1.5%的海藻酸盐溶液中,获得细菌海藻酸盐溶液。
3.如权利要求1所述的可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(4)具体为:配制250mMol/L浓度的氯化钙溶液,将细菌海藻酸盐溶液和250mMol/L浓度的氯化钙溶液二者在121℃,0.1~0.15MPa,20min条件下高温高压消毒;然后在无菌条件下,将步骤(2)的MIP-3α肿瘤细胞加入经高温高压消毒后的细菌海藻酸盐溶液中,此时获得的混合液为“MIP-3α肿瘤细胞细菌海藻酸盐溶液”。
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