[发明专利]用于检测甲基化DNA的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测甲基化DNA的体外方法，其包括

(a)将能够结合甲基化DNA的多肽附着到固相支持体；

(b)将所述多肽与包含甲基化和/或未甲基化的DNA的样品接触；和

(c)检测所述多肽与甲基化DNA的结合。

2.权利要求1的方法，其中步骤(c)包括限制酶消化、亚硫酸氢盐测序、焦磷酸测序、DNA印迹或者PCR。

3.权利要求1或2的方法，其中步骤(c)包括PCR。

4.权利要求1到3任一项的方法，其还包括步骤(d)分析甲基化的DNA。

5.权利要求4的方法，其中所述分析所述甲基化的DNA包括测序。

6.权利要求1到5任一项的方法，其中所述多肽选自：

(a)属于甲基-DNA结合蛋白(MBD)家族的多肽；

(b)(a)的多肽的片段，其中所述片段能够结合甲基化DNA；

(c)(a)的多肽或者(b)的片段的变体，其中与(a)的多肽或者(b)的片段相比，在所述变体中，一个或多个残基被替代，并且其中所述变体能够结合甲基化DNA；

(d)多肽，其是抗甲基化DNA抗体或者其片段；和

(e)多肽，其与(a)到(c)任一项的多肽至少70％同一并且能够结合甲基化DNA。

7.权利要求1到6任一项的方法，其中所述多肽融合到异源多肽。

8.权利要求7的方法，其中所述异源多肽选自HA-标签、myc6-标签、FLAG-标签、STREP-标签、STREP II-标签、TAP-标签、HAT-标签、壳多糖结合结构域(CBD)、麦芽糖-结合蛋白、His6-标签、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签、Intein-标签、链霉抗生物素蛋白-结合蛋白(SBP)标签和抗体的Fc部分。

9.权利要求6的方法，其中所述抗甲基化DNA抗体是抗-5-甲基胞嘧啶抗体或者其Fab、F(ab’)₂、Fv或scFv片段。

10.权利要求1的方法，其中所述固相支持体用所述多肽直接或者间接附着。

11.权利要求1的方法，其中所述样品来自受试者。

12.权利要求11的方法，其中所述受试者被怀疑具有低和/或超甲基化基因座。

13.权利要求12的方法，其中所述低和/或超甲基化基因座表明癌、肿瘤或者肿瘤转移。

14.用于根据权利要求1到13任一项的方法检测甲基化DNA的试剂盒，其包含

(a)能够结合甲基化DNA的多肽；

(b)可以用所述多肽附着的固相支持体；和

(c)附着所述固相支持体的手段；和

(d)检测甲基化DNA的手段。