[发明专利]动物双歧杆菌胞外多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种双歧杆菌，它产生的胞外多糖及其制备方法，尤其涉及一种动物双歧杆菌，它产生的胞外多糖及其制备方法。

背景技术

多糖是指由20个以上单糖组成的糖类化合物，是生物体重要的生物大分子之一，因其多变的结构而成为一种最具魅力的信息载体，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗炎、抗病毒等生理功能，并逐渐成为现代生物、医药、食品、化工行业的研究开发重点，具有很大的发展潜力。

多糖的结构是其生物活性的基础，多糖的活性直接或间接地受到结构的制约。何种结构的多糖才具有活性，结构的改变如何影响多糖活性，多糖的一级结构和高级结构与其生物活性间的构效关系是当前糖化学和糖生物学共同关注的焦点问题。多糖的结构分析在多糖研究中具有非常重要的地位，是糖化学的核心所在，也是研究多糖分子结构与功能关系的基础。多糖类物质抗病作用机理的研究揭示，多糖生物活性不仅是建立在多糖分子的一级结构(单糖组成、单糖间糖苷键的连接方式、糖苷键类型、异头物构型、取代基及取代位置、分支密度)基础上，而且还与多糖分子的超级结构即空间构象有关。

发明内容

本发明的目的是提供一种动物双歧杆菌，它产生的胞外多糖及其制备方法。

本发明所提供的动物双歧杆菌胞外多糖，其分子量为2.13×10⁴Da，单糖组成及摩尔比为Rha∶Ara∶Gal∶Glc∶Man＝0.4∶0.3∶1.6∶0.8∶1.2，主链的连接方式及顺序为→4)-α-D-Glcp-(1→，→3，4)-α-D-Manf-(1→，→4)-α-L-Rha-(1→，→3，4)-α-D-Manf-(1→，→4)-α-D-Galf-(1→，支链中两个α-D-Galp-(1→分别连接于两个→3，4)-D-Manf-(1→。

生产上述动物双歧杆菌胞外多糖的动物双歧杆菌已于2011年02月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.4599。

上述动物双歧杆菌胞外多糖的制备方法，是将动物双歧杆菌CGMCC No.4599厌氧培养，酶解除蛋白，离心去除菌体获得上清液，上清液经无水乙醇沉淀、Sevage法除蛋白、透析得到动物双歧杆菌胞外多糖粗品，所述动物双歧杆菌胞外多糖粗品溶液通过阴离子柱层析，阴离子柱层析洗脱液除盐后再进行凝胶柱层析，凝胶柱层析洗脱液除盐，得到动物双歧杆菌胞外多糖。

其中所述厌氧培养条件为适宜双歧杆菌增殖产胞外多糖的培养条件，如在PTYG培养基中37±1℃厌氧培养24-72小时。

上述酶解是在pH 7.5时，加入胰蛋白酶，45℃处理90min，然后灭活酶。

上述透析的截留分子量以8000-14000Da为宜。

上述阴离子柱可用50mM Tris-HCl洗脱。上述凝胶柱可用0.05mol/L NaCl洗脱。

本发明的动物双歧杆菌CGMCC No.4599是一种产胞外多糖的动物双歧杆菌，该胞外多糖是一种新型乳酸菌胞外多糖。

附图说明

图1动物双歧杆菌CGMCC No.4599的形态特性。

图2动物双歧杆菌EPS的DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析洗脱曲线。

图3一步纯化EPSb的Sepharose CL-6B凝胶层析洗脱曲线。

图4二步纯化EPSb的高效液相色谱图。

图5二步纯化EPSb的紫外扫描图。

图6HPAEC-PAD色谱图：

A为单糖标品(1.0μg/mL)HPAEC-PAD色谱图；B为二步纯化EPSb的HPAEC-PAD色谱图。

图7甲基化二步纯化EPSb的GC-MS总离子流气相色谱图。

图8二步纯化EPSb的¹H NMR谱图。

图9二步纯化EPSb的一级结构图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1、动物双歧杆菌胞外多糖(EPSb)的纯化

1、动物双歧杆菌EPSb的纯化

1)动物双歧杆菌EPS的制备

动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)LPL-RH的形态特征如图1；在PTYG固体培养基上的培养特征为乳白色不透明或半透明的菌落，凸起边缘整齐，有光泽；生理生化特性为不产生过氧化氢酶、具有果糖-6-磷酸解酮酶、糖醇发酵试验结果如表1。