[发明专利]一种奶牛宫颈粘液中抗精子抗体的检测方法无效
| 申请号： | 201110054994.1 | 申请日： | 2011-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN102253203A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 高庆华;马瑛;韩春梅 | 申请（专利权）人： | 塔里木大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/53 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 843300 新疆维吾*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 奶牛 宫颈 粘液 精子 抗体 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种奶牛宫颈粘液中抗精子抗体的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)取奶牛发情盛期的宫颈粘液在-20℃进行冷冻备用；
2)取0.25ml活率≥0.40、密度≥108精子/ml的公牛细管冻精，38℃水浴解冻，700g离心8min后弃上清液，加入EBSS 1ml悬浮，将悬浮液铺在预先放有2ml含10％胎牛血清的EBSS的试管底部，倾斜45°在37℃、5％CO2培养箱中孵育45min，取上层清液；
3)将500μl浓度为60μg/ml～160μg/ml的菠萝蛋白酶液加入500μl室温下化冻宫颈粘液中，37℃温育30min，2600g离心15min；
4)将步骤3)的上清液用EBSS液作1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256共8个梯度稀释至15μL，再加入15μL步骤2)制备的上层清液混匀，覆以20μL石蜡油，5％CO2、37℃孵育30min，凝集精子数计N，精子总数计Nz，以N/Nz≥10％判定为抗精子抗体阳性，＜10％为抗精子抗体阴性。
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