[发明专利]一种基于青霉素结合蛋白的检测β-内酰胺类抗生素的方法及专用试剂盒和试纸条

权利要求书

1.一种用于检测β-内酰胺类抗生素的受体试剂盒，包括：SEQ ID NO：1所示蛋白、酶标记的氨苄西林和标准品溶液，所述标准品为青霉素G。

2.根据权利要求1所述的受体试剂盒，其特征在于：所述受体试剂盒还包括底物显色液、终止液、洗涤液、样品稀释液、包被缓冲液和封闭液；

底物显色液由A液和B液组成，A液为2％(质量百分含量)过氧化脲的水溶液，B液为1％(质量百分含量)四甲基联苯胺的水溶液；

终止液为0.2M的硫酸水溶液；

每1升所述洗涤液是按照如下方法配制得到的：将0.5ml吐温20、5g叠氮化钠和990ml磷酸盐缓冲液混合，得到所述洗涤液；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M，pH值为7.4；

样品稀释液：0.1mol/L、pH值为7.2的磷酸盐缓冲液；

每1升包被缓冲液按照如下方法制备：将Na₂CO₃1.59g和NaHCO₃2.93g溶于1升水中，用水定容至1升，得到所述包被缓冲液；

每1升封闭液按照如下方法配制：将50mgBSA、1g叠氮化钠、30g酪蛋白混合，用磷酸盐缓冲液溶解并定容至1000ml，得到封闭液；其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.02M，pH值为7.2。

3.根据权利要求1或2所述的受体试剂盒，其特征在于：所述酶标记的氨苄西林为HRP标记的氨苄西林；

所述标准品溶液为青霉素G浓度如下的溶液：8.1μg/L、2.7μg/L、0.9μg/L、0.3μg/L、0.1μg/L。

4.根据权利要求1-3中任一所述的受体试剂盒，其特征在于：所述β-内酰胺类抗生素为如下中的至少一种：青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、邻氯西林、新青霉素III、双氯西林、羧苄西林、甲氧西林、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢羟氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟。

5.一种检测β-内酰胺类抗生素的胶体金试纸，包括样品吸收垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述胶体金垫包被有胶体金标记的带有HIS标签的SEQ IDNO：1所示蛋白；所述反应膜上含有检测带和质控带，检测带位置包被有阿莫西林与载体蛋白的偶联物，质控带位置包被有鼠抗HIS标签单克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的胶体金试纸，其特征在于：所述β-内酰胺类抗生素为如下中的至少一种：青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、邻氯西林、新青霉素III、双氯西林、羧苄西林、甲氧西林、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢羟氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟。

7.根据权利要求5或6所述的胶体金试纸，其特征在于：所述载体蛋白为OVA。

8.一种检测样品中β-内酰胺类抗生素的方法，为如下I或II所示：

I、检测样品中β-内酰胺类抗生素的方法包括如下步骤：

1)将待测样品进行前处理，得到待测样本溶液；

2)用权利要求1-4中任一所述受体试剂盒对所述待测样本溶液进行检测；

所述待测样品为牛奶：将牛奶用样品稀释液按1∶4稀释，4℃、10000rpm离心，取上清液，作为待测样本溶液；

所述待测样品为奶粉：称取1g奶粉，溶于5mL样品稀释液中，混合均匀，作为待测样本溶液。

所述待测样品为尿液：将尿液直接作为待测样本溶液；

所述待测样品为肌肉、鱼、虾或蛋：将待测样品匀浆处理，得到均质样品，将每5g均质样品加入10mL乙腈水溶液中，上下颠倒震荡10min，5000rpm离心10min，取上清，氮气吹干，用1mL样品稀释液重悬，得到的溶液即为待测样本溶液；乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为9∶1；

所述待测样品为蜂蜜：将每5g待测样品加入15mL去离子水中，混合；将所述混合溶液用Oasis固相萃取柱进行纯化，用甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用1mL样品稀释液重悬，得到的溶液即为待测样本溶液。

II、检测样品中β-内酰胺类抗生素的方法包括如下步骤：

1)将待测样品进行前处理，得到待测样本溶液；

2)用权利要求5-7中任一所述所述胶体金试纸对所述待测样本溶液进行检测；

所述样品稀释液为0.1mol/L、pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。