[发明专利]一种基于青霉素结合蛋白的检测β-内酰胺类抗生素的方法及专用试剂盒和试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于青霉素结合蛋白的检测β-内酰胺类抗生素的方法及专用试剂盒和试纸条。

背景技术

β-内酰胺类抗生素是一类含有四元β-内酰胺环结构抗生素的统称，是目前医药和兽药行业应用最多的一类抗生素，广泛用于治疗和预防葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌、大肠杆菌、嗜血杆菌、沙门氏菌引起的动物尿道、胃肠道、呼吸道感染以及奶牛乳房炎等疾病。长期摄入含有β-内酰胺类抗生素残留的食物可引起细菌耐药性增加，消化系统菌群失调，甚至诱发过敏反应。

随着人们对食品安全的日益重视，欧盟、中国、美国、日本等国家相继对动物源性食品中β-内酰胺类药物最大残留限量值作出了规定，其中欧盟规定青霉素G、氨苄西林、阿莫西林的MRL为4ppb，苯唑西林、邻氯西林、双氯西林、新青霉素III的MRL为30ppb，头孢噻呋、头孢氨苄的MRL为100ppb，头孢唑啉、头孢哌酮的MRL为50ppb，头孢喹肟的MRL为20ppb。

免疫分析方法是目前药物残留检测常用方法之一，其原理是基于抗原抗体的特异性结合，具有高灵敏度、高特异性的特性，其中酶联免疫吸附法和胶体金法又具备高通量、检测快速、操作简便、适用于现场筛查等优势，已广泛应用于药物残留筛查。免疫分析方法建立的基础是抗体，常规的抗体制备方法主要是免疫动物获得多克隆血清以及采用杂交瘤技术获得单克隆抗体，周期长、过程复杂、费用高。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测β-内酰胺类抗生素的受体试剂盒。

本发明所提供的用于检测β-内酰胺类抗生素的受体试剂盒，包括：SEQ ID NO：1所示蛋白、酶标记的氨苄西林和标准品溶液，所述标准品为青霉素G。

上述受体试剂盒中，所述受体试剂盒还包括底物显色液、终止液、洗涤液、样品稀释液、包被缓冲液和封闭液；

底物显色液由A液和B液组成，A液为2％(质量百分含量)过氧化脲的水溶液，B液为1％(质量百分含量)四甲基联苯胺的水溶液；

终止液为0.2M的硫酸水溶液；

每1升所述洗涤液是按照如下方法配制得到的：将0.5ml吐温20、5g叠氮化钠和990ml磷酸盐缓冲液混合，得到所述洗涤液；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M，pH值为7.4；

样品稀释液：0.1mol/L、pH值为7.2的磷酸盐缓冲液；

每1升包被缓冲液按照如下方法制备：将Na₂CO₃1.59g和NaHCO₃2.93g溶于1升水中，用水定容至1升，得到所述包被缓冲液；

每1升封闭液按照如下方法配制：将50mgBSA、1g叠氮化钠、30g酪蛋白混合，用磷酸盐缓冲液溶解并定容至1000ml，得到封闭液；其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.02M，pH值为7.2。

上述任一所述受体试剂盒中，所述酶标记的氨苄西林为HRP标记的氨苄西林；

上述任一所述受体试剂盒中，所述标准品溶液为青霉素G浓度如下的溶液：8.1μg/L、2.7μg/L、0.9μg/L、0.3μg/L、0.1μg/L。

上述任一所述受体试剂盒中，所述β-内酰胺类抗生素为如下中的至少一种：青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、邻氯西林、新青霉素III、双氯西林、羧苄西林、甲氧西林、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢羟氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟。

本发明的另一个目的是提供一种检测β-内酰胺类抗生素的胶体金试纸。

本发明所提供的检测β-内酰胺类抗生素的胶体金试纸，包括样品吸收垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述胶体金垫包被有胶体金标记的带有HIS标签的SEQ ID NO：1所示蛋白；所述反应膜上含有检测带和质控带，检测带位置包被有阿莫西林与载体蛋白的偶联物，质控带位置包被有鼠抗HIS标签单克隆抗体。

上述任一所述胶体金试纸中，所述β-内酰胺类抗生素为如下中的至少一种：青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、邻氯西林、新青霉素III、双氯西林、羧苄西林、甲氧西林、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢羟氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟。

上述任一所述胶体金试纸中，所述载体蛋白为OVA。

本发明的另一个目的是提供一种检测样品中β-内酰胺类抗生素的方法。

本发明所提供的检测样品中β-内酰胺类抗生素的方法，为如下I或II所示：