[发明专利]制备蛋白质的方法有效
| 申请号： | 201110062686.3 | 申请日： | 2011-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN102199214A | 公开（公告）日： | 2011-09-28 |
| 发明（设计）人： | 刘磊;方葛敏;李宜明;沈非;黄轶超;李佳斌;林云;崔洪奎 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/107 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 宋合成 |
| 地址： | 100084*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 蛋白质 方法 | ||
1.一种制备蛋白质的方法，其包括通过下列步骤将C端具有酰肼基团的第一肽与N端为半胱氨酸的第二肽连接：
将所述第一肽与所述第二肽在含有NaNO2的溶液中混合并调节pH至酸性pH，以便将所述第一肽的酰肼基团转化为酰基叠氮基团得到第一反应混合物；
向所述第一反应混合物中添加含有还原剂的溶液并调节pH至中性pH，其中所述还原剂含有巯基基团，以便所述第一肽的酰基叠氮基团转化为硫酯基团，维持所述中性pH进而所述第一肽的C端硫酯与所述第二肽的N端发生连接反应形成蛋白质。
2.根据权利要求1所述的制备蛋白质的方法，其中所述酸性pH为3.0-4.0。
3.根据权利要求1所述的制备蛋白质的方法，其中所述还原剂为4-巯基苯基乙酸。
4.根据权利要求1所述的制备蛋白质的方法，其中所述C端具有酰肼基团的第一肽是通过包括下列步骤的方法合成的：
表达含有内含子的蛋白质与C端没有酰肼基团的第一肽的融合蛋白；以及
对所述融合蛋白进行肼解，获得所述C端具有酰肼基团的第一肽。
5.根据权利要求1所述的制备蛋白质的方法，其中利用氢氧化钠调节pH至所述中性pH。
6.一种制备多肽硫酯化物的方法，其特征在于包括以下步骤：
将作为原料的C端具有酰肼基团的第一肽与含有NaNO2的溶液混合，并调节pH至酸性pH，以便将所述第一肽的酰肼基团转化为酰基叠氮基团得到第一制备反应混合物，
向所述第一制备反应混合物中添加含有还原剂的溶液，并调节pH至中性pH，其中所述还原剂含有巯基基团，以便所述第一肽的酰基叠氮基团转化为硫酯基团，形成所述多肽硫酯化物。
7.根据权利要求6的制备多肽硫酯化合物的方法，其中所述酸性pH为3.0-4.0。
8.根据权利要求6的制备多肽硫酯化合物的方法，其中所述还原剂为4-巯基苯基乙酸。
9.根据权利要求6的制备多肽硫酯化合物的方法，其中所述C端具有酰肼基团的第一肽是通过包括下列步骤的方法合成的：
表达含有内含子的蛋白质与C端没有酰肼基团的第一肽的融合蛋白；以及
对所述融合蛋白进行肼解，获得所述C端具有酰肼基团的第一肽。
10.根据权利要求1所述的制备蛋白质的方法，其中利用氢氧化钠调节pH至所述中性pH。
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