[发明专利]检测单细胞特异性抗体分泌的细胞微孔芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种细胞微孔芯片，其特征在于，所述芯片微孔的直径在30μm以下，深度在30μm以下。

2.如权利要求1所述的细胞微孔芯片，其特征在于，所述芯片微孔的直径在20μm以下，深度在20μm以下。

3.如权利要求1～2中任一项所述的细胞微孔芯片，其特征在于，所述生物相容性聚合物材料为聚二甲基硅氧烷。

4.一种在细胞水平检测抗体表达的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供权利要求1～3中任一项所述的细胞微孔芯片；

(2)将细胞接种到所述细胞微孔芯片上；

(3)用标记的抗体检测试剂与微孔杂交；和

(4)通过检测细胞表面或微孔内部的标记信号强度，确定微孔中细胞抗体表达的情况，实现抗体表达的检测。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在细胞接种前，在芯片的微孔中包被捕获抗体或抗原，用于捕获待测细胞表达的抗体。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述标记的抗体检测试剂为标记的细胞表达抗体的抗原或二抗和/或标记的荧光素。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述抗原或二抗使用生物素标记，所述荧光素使用亲和素标记。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述接种细胞为杂交瘤细胞或B细胞或分泌抗体的工程细胞。

9.一种检测细胞靶标的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供权利要求1-3中任一项所述的细胞微孔芯片；

(2)将细胞接种到所述细胞微孔芯片上；

(3)用标记的靶标检测试剂与微孔杂交；和

(4)通过检测微孔中的标记信号，确定细胞靶标。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在细胞接种前，在芯片的微孔中包被捕获细胞或细胞靶标的试剂。

11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的细胞靶标包括但不限于：细胞分泌的蛋白或小分子化合物，细胞表面蛋白等。

12.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的靶标检测试剂含有与靶标结合的物质，选自抗原、抗体、受体和配体。

13.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的标记为荧光标记。

14.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的细胞包括但不限于杂交瘤细胞、B细胞、分泌抗体的工程细胞、肿瘤细胞和胰岛细胞。

15.一种药物筛选方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供权利要求1-3中任一项所述的细胞微孔芯片；

(2)将细胞接种到所述细胞微孔芯片上，其中，所述待测细胞是经药物处理的细胞；

(3)用标记的靶标检测试剂与微孔杂交，和

(4)通过检测微孔中的标记信号，确定该经药物处理的细胞中所述靶标的表达，从而筛选出对所述细胞中所述靶标的表达产生影响的药物。

16.如权利要求4-15中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括同时用非特异性活体细胞标记染料Calcein-AM确定微孔中是否有细胞。