[发明专利]黑青斑河鲀干扰素IFNγ2及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种黑青斑河鲀干扰素IFNγ2，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.权利要求2所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的编码基因的制备方法，其特征在于以黑青斑河鲀总mRNA为模板，以RNA Oligo dT，其序列如SEQ ID NO:3为引物，进行反转录，得到cDNA；再以cDNA为模板，设计上游引物SEQ ID NO:4，下游引物SEQ ID NO:5，进行PCR，得到权利要求2所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的编码基因。

4.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的制备方法，是将黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到黑青斑河鲀干扰素IFNγ2。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述表达载体为大肠杆菌表达载体pET32a，重组表达质粒的构建包括以下步骤：以含黑青斑河鲀干扰素IFNγ2编码基因的质粒为模板，设计上游引物SEQ ID NO:6，下游引物SEQ ID NO:7进行PCR，PCR产物克隆到pET32a上，得到重组表达质粒。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述培养转化的大肠杆菌的培养条件为含氨苄青霉素LB液体培养基，30℃，250rpm振荡培养过夜，再接种到37℃预热的含氨苄青霉素 TB液体培养基中，培养至OD600达到0.6。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述诱导为加入IPTG至终浓度为0.5mmol/L，诱导时间为7小时。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述纯化是将总菌体用Native Binding Buffer洗涤，再用Native Binding Buffer重悬，超声处理后，高速离心获得裂解上清液，经固定化金属配体亲和层析纯化，收集洗脱的蛋白。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述酶切是用rEK酶。

10.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ2在制备鱼类免疫调节添加剂或鱼类免疫佐剂中的应用。