[发明专利]一种海洋链霉菌及利用其制备星形孢菌素和K-252d的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667，及利用该菌制备抗肿瘤化合物星形孢霉素(staurosporine)和K-252d的方法。

背景技术：

人类面临的众多问题中疾病的威胁尤为严重，上世纪来源于放线菌的放线菌素D，道诺红菌素，丝裂霉素，四环素和万古霉素等微生物次级代谢产物在对抗疾病的方面起了极为重要的作用。但随着耐药性病原菌的增加，必须开发新药和寻找新的药用资源。

星形孢菌素(staurosporine，CAS No.62996-74-1)，其结构如式(1)所示；K-252d(CASNo.105114-22-5)，其结构如式(2)所示，两者都属于吲哚并咔唑类生物碱。

式(1)                    式(2)

星形孢菌素最初发现于Streptomyces staurosporeus(AM-2282)菌株的发酵产物中，K-252d发现于Nocardiopsis sp.(K-290)菌株的发酵产物中。星形孢菌素和K-252d具有抗细菌，抗真菌，降血压，血小板凝聚，抗肿瘤以及神经保护等多种生物活性，尤其是作为蛋白激酶C的有效抑制剂，在治疗癌症方面极具研究开发的价值。

发明内容：

本发明的第一个目的在于提供一种能够生产抗肿瘤化合物星形孢菌素和K-252d的海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667，该菌于2010年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.4360。

本发明的海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667是从我国南海海底沉积物中分离得到的。

该菌株的分类学特征是：

菌落干燥，单菌落一般呈圆形，较小，较紧密，不易扩散，中间凸起，基内菌丝与气生菌丝结合紧密不易挑起，末期产孢子后，孢子易刮取。在ISP2培养基上菌落白色，基内菌丝褐色，后期菌落灰白色；在ISP3培养基上，菌落白色，边缘稍微呈辐射状，菌落紧密，中间凸起，较厚，基内菌丝颜色较淡，后期菌落灰色，向四周扩散，粉状孢子，基内菌丝黄褐色；在M-ISP4培养基上菌落白色，菌丝体较厚，中间凸起，基内菌丝周围灰褐色，后期菌落灰色，粉状孢子，基内菌丝黄褐色；在Nutrient Agar培养基上气生菌丝白色，基内菌丝周围黑褐色，此培养基上长势较差；在MJNP2培养基上，菌落白色，基内菌丝周围黑褐色，后期菌落黑褐色，基内菌丝黄褐色，菌落边缘出现黑色。在以上培养基上，末期均产生灰色孢子。初步鉴定属于链霉属的一个种，定名为海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667，该菌于2010年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.4360。

本发明的第二个目的是提供利用海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667制备星形孢菌素和K-252d的方法，其特征在于，星形孢菌素和K-252d是从海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667的发酵培养物中制备得到的。

优选：所述的利用海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667制备星形孢菌素和K-252d的方法具体包括以下步骤：

(1)：制备海洋链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO1667的发酵培养物，将发酵培养物离心，取上清液；

(2)：上清液上大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的去离子水洗脱，再用体积分数为95％的乙醇水溶液洗脱，体积分数为95％的乙醇水溶液的洗脱液浓缩得浸膏，浸膏经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂从体积比10∶0～8∶2梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为96∶4洗脱的馏分A，收集氯仿-甲醇体积比为9∶1洗脱的馏分B，馏分A浓缩后再经正相硅胶柱层析，以乙酸乙酯-石油醚体积比7∶4洗脱，得到化合物星形孢菌素；馏分B经正相硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂从体积比10∶0～88∶12梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为94∶6～93∶7洗脱的馏分，浓缩再经反相硅胶柱层析，以水-甲醇为洗脱剂从体积比75∶25～0∶100梯度洗脱，收集水-甲醇体积比为3∶7洗脱的馏分，得到K-252d。