[发明专利]一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒

权利要求书

1.一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，包括：

(1)尿样保存液：含有硫酸铵和去垢剂；

(2)核酸提取液：含有磁性颗粒和捕获探针；

(3)UU反应液：含dNTPs和NTPs扩增所需组份；

(4)UU检测液：为恒温扩增时必需的UU引物和UU荧光探针溶解在TE溶液中配制而成；其中UU检测液中的引物包含有以下一对或几对序列：

UU T7：aatttaatac gactcactat agggagacta ctacactcta ggtttacagt tt；

       aatttaatac gactcactat agggagacct actacactct aggtttacag；

       aatttaatac gactcactat agggagaagc gtcgcaatag atgtcaaacc；

       aatttaatac gactcactat agggagaagc gtcgcaatag atgtcaaacc tag；

UU nT7：agccgcggta atacatagga tgcaag；

        agccgcggta atacatagga tg；

        agtagtccac accgtaaacg a；

        tagtagtcca caccgtaaac gatcatca；

UU检测液中的探针包含有以下一种或几种序列：

UU probe：ccgagcggtg ttgtagctaa ctcgg；

          ccgagtctag atgcttaacg tctcgg；

(5)SAT酶液：为恒温扩增时的多酶组分体系，含T7 RNA聚合酶200～2000U/反应、M-MLV反转录酶400～4000U/反应、2～10mM HEPES pH7.5、10～100mM N-acetyl-L-cysteine、0.04～0.4mM zinc acetate、10～100mM trehalose、40～200mM Tris-HCl pH 8.0、40～200mMKCl、1～10mM EDTA、2～20％v/v Triton X-100、10～40％v/v glycerol；

(6)UU阳性对照：为失活的UU菌，浓度为2×10⁵CFU/ml；

(7)UU阴性对照：为不含有SEQ.ID.NO13核酸序列或不含有解脲脲原体的溶液。

2.根据权利要求1所述的一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括洗涤液，洗涤液具体包含十二烷基磺酸钠0.1～1％，NaCl10～150mM，乙醇0.1～1％。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述步骤(1)中的尿样保存液具体包括0.1～10M硫酸铵；0.15～1M 4-羟乙基哌嗪乙磺酸。

4.根据权利要求1或2所述的一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述步骤(2)中的核酸提取液为捕获核酸时必须的一个组分，具体包含磁珠0.1～10mg/ml，TCO 0.1～100μM。

5.根据权利要求1或2所述的一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述步骤(2)中的核酸提取液中的捕获探针，包含有以下一种或几种序列：ccatccaaaa gcgtcgcaaa cgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa；ccccaccttc ctctaccttg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa。

6.根据权利要求1或2所述的一种利用RNA恒温扩增的解脲脲原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述步骤(3)中的UU反应液具体包含Tris 10～50mM，MgCl₂ 10～40mM，dNTP0.5～5mM，NTP 1～10mM，PVP40 1～10％，KCl 5～40mM。