[发明专利]一种重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法

权利要求书

1.一种重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，其特征在于包括以下步骤：

（1） 材料的准备  取生长旺盛的重楼植物白色幼嫩根尖，置于冰水混合物中预处理36—48h，卡诺Ⅰ（冰醋酸：酒精= 3：1）固定6—12h，转移至70%酒精中，然后在4℃冰箱中保存备用；

（2） 制片  将备好的的重楼植物幼嫩根尖用盐酸解离，然后用蒸馏水洗净后用45%的醋酸压片，液氮揭片，无水乙醇脱水12h，置室内自然干燥2—3d；

（3） 变性  将步骤2中的制片，放入在染缸中已预热好的60℃的0.2 molL^-1盐酸中处理155s，再用蒸馏水洗净；然后用氢氧化钡饱和溶液处理9—12min，用预热的蒸馏水置换洗至澄清；再用稀盐酸冲洗两次，除去残留的碳酸钡沉淀，再用蒸馏水洗净，洗净后将制片转另一干净染缸；

（4） 复性  将步骤3中的制片，用2×SSC洗一次，然后加入2×SSC，放入已预热至30℃的水浴锅内，缓慢升温至60℃开始计时1—1.5h；

（5） 染色  将步骤4中的制片，用pH为6.8的磷酸缓冲液冲洗两次，然后置于Giemsa染液中，在37—38℃的恒温箱内染色1.5—2.0h；

（6） 镜检  在光学显微镜下观察，选取染色体分散良好，带纹清晰均匀的细胞拍照分析，得出结果，或用Eupara胶在盖片四周进行固封，制成半永久封片后观察，分析后得出结果。

2.根据权利要求1所述的重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，其特征在于：作为优选，在步骤1中，所取生长旺盛的重楼植物白色幼嫩根尖的长度为0.5—1.5cm，于10:00—11:30时或15:00—16:00时选取最佳。

3.根据权利要求1所述的重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，其特征在于：作为优选，在步骤2中，0.2 molL^-1盐酸在室温（22—24 ℃）下解离1.0—1.5h；采用体积浓度为45%的醋酸压片。

4.根据权利要求1所述的重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，其特征在于：在步骤3中，氢氧化钡饱和溶液的制备方法为，称取过量氢氧化钡加热溶解，冷却后过滤制得；置换清洗用的预热蒸馏水温度为38℃；冲洗的稀盐酸的浓度为0.05 molL^-1。

5.根据权利要求1所述的重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，其特征在于：在步骤5中，Giemsa染液的配比为Giemsa母液：磷酸缓冲液=1：9。