[发明专利]一种胰岛冻存保护剂及其使用方法

权利要求书

1.一种胰岛冻存保护剂，其特征在于：所述胰岛冻存保护剂包括A液、B液、C液和D液，组成如下：

A液为基础冻存培养基，组成为M-199培养基50%～70%, AB血清30%～50%，1M Hepes 1～3%，乌司他丁100～200IU/ml；B液为2M DMSO冻存培养基，含DMSO14.2%，基础冻存培养基85.8%；C液为3M DMSO冻存培养基，含DMSO 21.3%，基础冻存培养基78.7%；D液为异丙醇；上述百分比均表示体积百分比。

2.一种如权利要求1所述的胰岛冻存保护剂的使用方法，其特征在于：所述使用方法的具体步骤如下：

1)      胰岛细胞的准备：按常规方法分离胰岛细胞；

2)      将胰岛细胞装入离心管中，在280×g的离心力下离心1分钟；

3)      吸弃上清液；

4)      在离心管内加入10～20ml的A液，在280×g的离心力下离心1分钟，吸弃上清，再加入A液10～15ml重悬细胞，转移入细胞冻存袋；

5)      在细胞冻存袋中加入B液5～10ml； 

6)      室温下预孵育细胞3～5分钟；

7)      再次加入5～10ml B液；

8)      室温下孵育5～10分钟；

9)      加入20～30ml C液，室温下孵育5～10分钟；

10)  将细胞冻存袋置于D液中，放入4℃冰箱5～15分钟；

11)  将细胞冻存袋移出4℃冰箱，连同D液一起放入-80℃超低温冰箱中12～16小时；

12)  取出细胞冻存袋，将细胞冻存袋置入液氮中长期保存。