[发明专利]一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验领域中的一种分析试剂，具体涉及用于测定血液中肌酸激酶MB同工酶活性的试剂。

背景技术

肌酸激酶(CK)有三种主要的同工酶，即CK-MM，CK-MB，CK-BB。肌酸激酶MB同工酶（CK-MB），主要存在于心肌中，是心肌酶谱中最有特异性的酶，从八十年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”，应用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊断, 是诊断及监测AMI病人病情敏感而特异的指标。

临床上最普遍采用免疫抑制法，其原理：免疫抑制法试剂中的抗CK-M抗体抑制CK-M亚基，即抑制CK-MM活性和CK-MB的CK-M亚单位的活性，通过测定样品中未被抑制的CK-B单体的活力（相当于一半CK-MB活力），所以将结果乘以2，计算出CK-MB的活力， CK-MB试剂的检测灵敏度相应也比CK 低一半左右，由于CK-MB参考值 <25 U/L,其上限25 U/L的每分钟吸光度变化值只有 0.003左右，检测仪器的温飘及脂浊标本的干扰，都会产生较大的测量误差，使得测定结果不可靠。申请号 200610114997.9 的专利通过反应生成过氧化氢+鲁米诺+过氧化物酶化学发光法测定肌酸激酶MB同工酶活性，虽然有较高的检测灵敏度，但由于肌酸激酶在血清中很容易失活，通常要加入巯基试剂保持其活力，巯基试剂会严重抑制过氧化氢 +过氧化物酶反应，使其测定结果不可靠性。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂，含有：硫代氧化型辅酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）、巯基试剂、镁盐、葡萄糖激酶（GLUK）（或己糖激酶）、抗CK-M抗体、磷酸肌酸（CP），二磷酸腺苷(ADP)、葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）。

优选地，上述硫代氧化型辅酶为硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Thio-NAD)或其盐，或者硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Thio-NADP)或其盐；所述巯基试剂为N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)或硫代甘油(TG)。

进一步地，上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂，还可以含有：一磷酸腺苷(AMP)、二腺苷五磷酸(P¹,P⁵-DiAP)、稳定剂和防腐剂。

上述稳定剂为蛋白稳定剂、二糖、多糖、多元醇、氨基酸、螯合剂或非离子表面活性剂的一种或两种以上任意混合物；所述防腐剂为PROCLIN 系列防腐剂、叠氮钠、庆大霉素、氯霉素、对羟基苯甲酸甲酯、脱氧乙酸及其盐或阳离子表面活性剂中的一种或其两种以上任意混合物。

优选地，所述肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂为含有如下浓度成分的溶液：

磷酸肌酸             5-200 mmol/L

二磷酸腺苷           0.5-20 mmol/L

葡萄糖               1-200 mmol/L

葡萄糖激酶（或己糖激酶）  0.1-100 KU/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶   0.1-100 KU/L

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶    0.1-100 KU/L

硫代氧化型辅酶       0.1-50 mmol/L

巯基试剂             1-100 mmol/L

抗CK-M 抗体      CK-M 抑制>500 U/L

镁盐               1-100 mmol/L

上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂，还可含有如下浓度的成分：

一磷酸腺苷       0.5-20 mmol/L

二腺苷五磷酸     0.001-0.1 mmol/L

稳定剂           0.1-20 mmol/L

防腐剂           0.1-20 g/L

上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的制备方法为：将各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中。

上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂可为双试剂，包括：试剂1和试剂2，所述试剂1包括以下成分：二磷酸腺苷、葡萄糖、葡萄糖激酶（或己糖激酶，优选葡萄糖激酶）、G6PDH、6PGDH 、硫代氧化型辅酶、巯基试剂、抗CK-M 抗体、镁盐，所述试剂2包括以下成分：磷酸肌酸。

上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂（双试剂）的制备方法，步骤为：1）将第一剂的各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中，备用；2）将第二剂的成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中，备用。