[发明专利]检测慢性乙肝肝纤维化血清N-糖组峰标记的方法及其用途

权利要求书

1.检测慢性乙型肝炎肝纤维化血清N-糖组峰标记的方法，其特征在于，采用DSA-FACE技术检测慢性HBV感染患者血清样本测得具有峰值的糖组图谱，将峰值量化后，采用内参校正后的数据，获得非创伤性慢性乙型肝炎肝纤维化血清N-糖组峰标记。

2.按权利要求1的方法，其特征在于，其包括下述步骤：

1）采集检测血清样本，

2）寡糖的释放，

血清加入含有NH4HCO3缓冲液和水的PCR反应管中，95℃加热后4℃放置，加入PNGase F37℃孵育，4℃冷浴后加水，标记为D管；

3）寡糖的标记，

从D管吸取溶液加入新的PCR管中，开盖60℃ 烘干，加入标记溶液，37℃孵育，加水终止反应，标记为L管；

4）去唾液酸，

从Ｌ管取溶液加入新的ＰＣＲ管中，加入去唾液酸酶在37℃孵育过夜，加水振荡混匀，标记为DE管；

5）片段分析：

取DE管溶液用ABI3130测序仪进行片段分析，数据经GeneScan软件分析；

6）将测得的具有峰值的糖组图谱峰值量化，采用内参校正后的数据，获得慢性乙肝肝纤维化血清N-糖组峰标记及其相关修饰指标mRNA、MircoRNA。

3.按权利要求2的方法，其特征在于，所述步骤2）的PNGase F中：2.2U/μl，pH8.3，3.33% NP40。

4.按权利要求2的方法，其特征在于，所述步骤3）的标记溶液中，20mmol/L的APTS与1mol/L 的NaBH3CN比为1:1。

5.按权利要求2的方法，其特征在于，所述步骤6）的糖组图谱峰值包括早期纤维化组与晚期纤维化组的4种血清N-糖组峰值。

6.按权利要求5的方法，其特征在于，所述慢性乙型肝炎肝纤维化血清N-糖组峰标记，以肝活检病理学诊断明确纤维化程度，其中S0、S1期列为早期纤维化组，S3、S4期列为晚期纤维化组。

7.权利要求1的检测慢性乙型肝炎肝纤维化血清N-糖组峰标记的方法在制备预测慢性乙型肝炎肝纤维化的程度制剂中的用途。

8.权利要求1的检测慢性乙型肝炎肝纤维化血清N-糖组峰标记的方法在制备慢性乙型肝炎肝纤维化诊断试剂盒或诊断试剂中的用途。

9.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的N-糖组峰标记相关指标mRNA、MircoRNA在制备慢性乙型肝炎肝纤维化诊断试剂盒或试纸或试剂中的用途。