[发明专利]登革病毒样颗粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.登革病毒1-4病毒样颗粒重组载体转化的P .pastoris酵母菌株，其分别为pGAPZ-α-PrMED1-X33、pGAPZ-sPrME472-D2-X33、pGAPZ-sPrME-D3-X33和pGAPZ-sPrME-D4-X33，分别于2011年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，编号分别为CCTCC M 2011063、CCTCC M 2011064、CCTCC M 2011065和CCTCC M 2011066。

2.登革病毒1-4病毒样颗粒，其特征在于由权利要求1所述重组载体转染P.pastoris酵母X33细胞并分泌所得。

3.登革病毒1-4病毒样颗粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1) 采用RT-PCR技术从DENV-1 GZ01/95株、DENV-2 ZS01/01株、DENV-3 H87株以及DENV-4 H241株中分别获得四个型登革病毒的prM-E基因元件；

2）对1～4 型登革病毒CprM-E或prME基因的表达元件进行改造，在prM基因N端设计理想的信号肽序列，替换四型登革病毒E基因锚定区的部分基因；

3）将四个型登革病毒的prM-E基因改造元件分别克隆入真核系统表达载体中；

4）用3）中得到的重组表达载体分别转染P.pastoris酵母X33细胞，并使其分泌表达登革病毒病毒样颗粒；

5）用SDS-PAGE和Western blot检测目的基因表达；

6）用15-60质量%蔗糖密度梯度离心和电镜技术，检测病毒样颗粒的形态特征。

4.登革病毒1-4病毒样颗粒在制备预防登革类疾病的疫苗中的应用。