[发明专利]一株抗日本血吸虫Sj14-3-3蛋白单克隆抗体及其在免疫诊断中的应用无效
| 申请号： | 201110075088.X | 申请日： | 2011-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN102180968A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 余传信;钱春艳;殷旭仁;王玠;宋丽君;张伟;梁幼生;高琪 | 申请（专利权）人： | 江苏省血吸虫病防治研究所 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;G01N33/577 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214064 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗日 血吸虫 sj14 蛋白 单克隆抗体 及其 免疫诊断 中的 应用 | ||
1.一种抗重组Sj14-3-3蛋白的单克隆抗体，由保藏号为CCTCC C201118的杂交瘤细胞JYQ5C6-1产生。
2.产生权利要求1所述单克隆抗体的重组Sj14-3-3蛋白的表达，其特征在于将编码Sj14-3-3蛋白分子核苷酸片段SEQ ID NO：2插入到一种表达载体pEGX-4T-3编码谷胱甘肽转移酶GST基因的下游，构建重组表达载体Sj14-3-3/pEGX-4T-3，然后将重组表达载体Sj14-3-3/pEGX-4T-3转化入一种宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中表达一种含有由载体编码的谷胱甘肽转移酶GST与日本血吸虫Sj14-3-3蛋白组成的GST- Sj14-3-3融合蛋白粗制品；
采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法对GST- Sj14-3-3融合蛋白粗制品进行纯化，获得纯化的GST-Sj14-3-3融合蛋白；
将纯化的GST-Sj14-3-3融合蛋白用凝血酶切割，使GST-Sj14-3-3融合蛋白裂解为GST和重组Sj14-3-3蛋白两部分，再用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法去除酶切产物中的GST蛋白，从而获得纯化的重组Sj14-3-3蛋白。
3.权利要求2所述的重组Sj14-3-3蛋白的表达，其特征在于重组Sj14-3-3蛋白分子的核苷酸序列与SEQ ID NO：2保持有至少90%的同源性。
4.权利要求2所述的重组Sj14-3-3蛋白的表达，其特征在于重组Sj14-3-3蛋白分子的氨基酸序列与Sj14-3-3蛋白分子的氨基酸序列蛋白SEQ ID NO：1保持有至少90%的同源性。
5.权利要求1所述的抗重组Sj14-3-3蛋白的单克隆抗体的应用，其特征在于在血吸虫感染免疫诊断中用于检测血吸虫感染患者或动物血液中循环抗原Sj14-3-3蛋白所使用的抗体。
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