[发明专利]一株抗日本血吸虫Sj14-3-3蛋白单克隆抗体及其在免疫诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株抗日本血吸虫Sj14-3-3蛋白单克隆抗体及其在免疫诊断中的应用，属于寄生虫病免疫诊断技术领域。

背景技术

在世界上的热带与亚热带地区，有76个国家有血吸虫病流行，有近6亿人口受到血吸虫感染的威胁，每年有2000多万人死于血吸虫病。在中国虽然血吸虫病的防治工作取得了巨大的成就，但全国仍有454个县有血吸虫病流行，有病人近42万（2008年全国流调资料），血吸虫病依然是危害世界及我国人民身体健康的重要公共卫生问题。建立有效的血吸虫病诊断方法，对血吸虫病人、家畜及中间宿主做出准确的诊断，并及时进行治疗，对消灭血吸虫病传染源，控制血吸虫病的流行具有重要的意义。常用的血吸虫病诊断方法有多种：

病原学检测

采用显微镜检测病人粪便中是否有血吸虫的虫卵，或采用孵化法检测病人粪便是否能孵化出血吸虫的毛蚴来判断患者是否感染了血吸虫。该方法是血吸虫病诊断的金标准。缺点是虫卵进入粪便的时间与部位是不均一的，极易造成漏检，假阴性率高。此外，虫卵的产生要在血吸虫感染后3-4周，没有早期诊断的价值；以粪便为检测对象，方法难以为检测人员所接受。

DNA检测

DNA是生命体的重要组成成分，是生命体存在的重要证据。检测到血吸虫特异性DNA分子表明宿主体内存在血吸虫活动性感染，具有重要的诊断价值。目前已经建立的血吸虫病DNA检测诊断方法包括：聚合酶链反应方法（PCR）及环介导温DNA扩增方法（LAMP）等。PCR方法由于操作复杂，需要特殊的仪器设备，在基层血吸虫病防治单位难以开展。LAMP法由于操作间单，敏感性高，容易被基层血吸虫病防治人员所掌握，缺点是容易污染，假阳性高，需要进一步改进操作过程，建立标准的操作规范，才能满足现场应用的需要。

免疫学诊断

血吸虫感染宿主后在宿主体内进行生长发育，其排泄分泌物（抗原）进入宿主体内，刺激宿主免疫系统产生特异性免疫反应，产生特异性的抗体。通过免疫学方法检测宿主体内血吸虫特异性抗原或抗体同样具有血吸虫病诊断价值。

抗体在血吸虫感染发生后1-2周即出现，并且持续存在于患者体内。对于血吸虫初次感染者，检测抗体具有诊断与早期诊断的价值；对于有继往感染史者，检测抗体则确诊价值不足，但抗体水平的变化对诊断有一定的参考意义。已经建立的检测血吸虫特异性抗体检测方法有很多。包括：酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫层析法（试纸条法）、免疫渗滤法、间接血凝法（IHA）、环卵沉淀法（COPT）、免疫磁珠法、免疫印渍法等，这些方法均已在血吸虫感染筛查中获得应用。它们的共同缺点是检测结果的特异性受到所用抗原纯度及抗原本身的特异性所影响，对有继往感染史者没有确诊价值。

存在于宿主血液中的血吸虫特异性抗原是指从血吸虫虫体上脱落或分泌到宿主血液中的蛋白、脂类或糖类成份，这类成份随虫体存在而存在，随虫体消失而消失，是宿主体内存在血吸虫活动性感染的直接证据。检测这类成份或其抗原表位能对血吸虫活动性感染进行确诊，并具有疗效考核价值。检测循环抗原的关键是要制备特异性的单克隆抗体，并建立相应的敏感而特异的检测方法。针对血吸虫的各类循环抗原，国内、外分别制备了一些特异性单克隆抗体，常用的检测方法是酶联免疫吸附法（ELISA）。但是，这类方法的一个共同缺点是检测的循环抗原靶标不明确，检测结果的特异性存在问题，此外，常规ELISA的敏感性不足，难以满足现场应用的需要。

因此，进一步改进现有的循环抗原检测方法的效能，需要选择明确的检测靶标，制备特异性单克隆抗体，采用更灵敏的检测方法，以提高其特异性与敏感性。

发明内容

本发明提供一种日本血吸虫信号传导蛋白Sj14-3-3的特异性单克隆抗体，以及检测患者血清中循环抗原Sj 14-3-3蛋白的时间分辩荧光检测方法（TRFIA），可以进一步提高血吸虫循环抗原检测的特异性与敏感性。

本发明的技术方案：为达到上述目的，本发明选择日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3分子（Sj14-3-3）为循环抗原检测的靶标。

一种抗重组Sj14-3-3蛋白的单克隆抗体，由保藏号为CCTCC C201118的杂交瘤细胞JYQ5C6-1产生。