[发明专利]一种制备紫色杆菌素的方法及其专用菌

权利要求书

1.一种重组甲基扭曲杆菌，是将紫色杆菌素生物合成相关基因簇导入宿主甲基扭曲杆菌中得到的。

2.根据权利要求1所述的重组甲基扭曲杆菌，其特征在于：所述紫色杆菌素生物合成相关基因簇是通过载体pCM110导入的。

3.根据权利要求1或2所述的重组甲基扭曲杆菌，其特征在于：所述宿主甲基扭曲杆菌为甲基扭曲杆菌(Methylobacterium extorquens)，具体为甲基扭曲杆菌(Methylobacterium extorquens)AM1 ATCC 14718。

4.根据权利要求1-3中任一所述的重组甲基扭曲杆菌，其特征在于：所述紫色杆菌素生物合成相关基因簇为核苷酸序列如序列表中序列1所示的DNA分子。

5.一种重组甲基扭曲杆菌，其保藏号为CGMCC No.4704，其分类命名为甲基扭曲杆菌(Methylobacterium extorquens)。

6.一种制备紫色杆菌素的方法，包括如下步骤：发酵培养权利要求1-5中任一所述重组甲基扭曲杆菌，得到紫色杆菌素。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述发酵培养中，所用的发酵培养基由Na₂HPO₄·12H₂O、(NH₄)₂SO₄、K₂HPO₄·3H₂O、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·H₂O、Na₂MoO₄、ZnSO₄·7H₂O、H₃BO₃、MnSO₄·H₂O、CoCl₂·6H₂O、FeSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、甲醇、色氨酸、四环素和水组成；

Na₂HPO₄·12H₂O在发酵培养基中的浓度为3.5-4.5g/L，(NH₄)₂SO₄在发酵培养基中的浓度为0.5-1.0g/L，K₂HPO₄·3H₂O在发酵培养基中的浓度为1.3-2.5g/L，MgSO₄·7H₂O在发酵培养基中的浓度为0.2-1.2g/L，CaCl₂·H₂O在发酵培养基中的浓度为1-5mg/L，Na₂MoO₄在发酵培养基中的浓度为30-50ug/L，ZnSO₄·7H₂O在发酵培养基中的浓度为100-150ug/L，H₃BO₃在发酵培养基中的浓度为10-40μg/L，MnSO₄·H₂O在发酵培养基中的浓度为60-120μg/L，CoCl₂·6H₂O在发酵培养基中的浓度为20-50μg/L，FeSO₄·7H₂O在发酵培养基中的浓度为0.6-1.5mg/L，CuSO₄·5H₂O在发酵培养基中的浓度为20-50ug/L，甲醇在发酵培养基中的浓度为0.5％-2％(体积百分含量)，色氨酸在发酵培养基中的浓度为0.2g/L-0.7g/L，四环素在发酵培养基中的浓度为8μg/ml-12μg/ml。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述发酵培养包括如下步骤：将所述重组甲基扭曲杆菌接种于所述发酵培养基，先在30℃条件下培养至发酵体系的OD₆₀₀值为0.6-1.2，再将发酵体系在20℃发酵30-50h，具体为40h；所述发酵体系为发酵容器内的所有物质；所述OD₆₀₀值具体为0.8。