[发明专利]基于脂质体包埋多巴胺的电化学免疫检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及电化学免疫领域，特别涉及一种基于包埋多巴胺的小单层脂质体的电化学免疫检测方法。

背景技术

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率居全球首位，并呈逐年增多的趋势。小细胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)是恶性程度最高的肺癌，病例占所有肺癌病例的15～20％，肿瘤细胞具有分化程度低、倍增时间短、分裂指数高、早期易出现远处转移等特异的生物学行为，对放疗和化疗高度敏感，多数患者病情发展快，短期内死亡，因此，对小细胞肺癌进行早期诊断、制定合理治疗方案及评估疗效尤为重要。目前用于肺癌辅助诊断的主要方法有胸片、CT、以及痰细胞学检查等，而血清肿瘤标志物的检测由于取样简单、易于接受等特点，在肿瘤筛查、诊断、评价疗效等方面具有较大的实用价值。

胃泌素释放肽(GRP)是由McDonald等在1978年从猪的胃组织中分离出一种具有促胃泌素分泌作用的胃肠道激素，是有效促分泌素或调节肽，由27个氨基酸组成的肠、脑肽。研究者发现胃泌素释放肽(GRP)可存在于正常人脑、胃的神经纤维以及胎儿肺的神经内分泌组织中。许多小细胞肺癌(SCLC)细胞株和肿瘤组织中也分泌胃泌素释放肽(GRP)，且富含胃泌素释放肽(GRP)受体，因此，胃泌素释放肽(GRP)可以作为小细胞肺癌的标志物。但是由于胃泌素释放肽(GRP)可被肽链端解酶快速降解，所以很难在血清中检测到。胃泌素前体释放肽(ProGRP)是胃泌素释放肽(GRP)的前体结构，由于结构稳定，因此可在血浆中稳定表达，且胃泌素前体释放肽的水平可以间接反映胃泌素释放肽(GRP)的水平和胃泌素释放肽(GRP)基因的表达水平，因此胃泌素前体释放肽(ProGRP)作为新的标志物在小细胞肺癌(SCLC)诊断及疾病进展监测等方面的临床价值日益受到关注。日本学者山口研究表明这一标志物的敏感性为76％，特异性为97％，阳性结果预测值94％，阴性结果预测值87％，胃泌素前体释放肽(ProGRP)的水平和治疗反应具有较好的相关性。综合国内外的报道结果，胃泌素前体释放肽(ProGRP)作为小细胞肺癌(SCLC)新的标记物，具有敏感性高、特异性强的特点，并可准确反映小细胞肺癌(SCLC)病情及对化疗的反应。因此，将对小细胞肺癌(SCLC)的诊断具有较高敏感度，特异度和准确率的胃泌素前体释放肽作为提示小细胞肺癌(SCLC)的血清肿瘤标志物，可为临床鉴定小细胞肺癌(SCLC)提供参考依据。胃泌素前体释放肽作为血清肿瘤标志物，不仅可用于小细胞肺癌(SCLC)的早期诊断，还有助于判断治疗效果及早期发现肿瘤复发。目前，国内外采用酶联免疫方法测定胃泌素前体释放肽(ProGRP)已处于临床应用阶段，但是酶联免疫法灵敏度不高，不易检测出痕量胃泌素前体释放肽(ProGRP)，影响对小细胞肺癌(SCLC)检测的准确性。

电化学发光(ECL)是通过在电极上施加一定波形的电压或电流信号，进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象。电化学发光(ECL)与化学发光(CL)的差异在于，电化学发光(ECL)是电启动发光反应，而化学发光(CL)是通过化合物混合启动发光反应。因此，电化学发光(ECL)反应易精确控制，具有灵活性和稳定性。电化学免疫分析法(Electrochemical Immunoassay，ECIA)是将免疫技术与电化学检测结合的一种免疫分析新方法，基于抗原和抗体的特异性反应，将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量，兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性。电化学免疫分析的标记物主要有两类：生物酶及电化学活性物质。用作标记物的电化学活性物质为具有电化学氧化还原性质的金属离子和电活性的有机功能基团。

脂质体，是由两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起避开水相，而亲水头部暴露在水相形成的具有双分子层结构的封闭囊泡，可以通过表面修饰和内部包埋成为各种功能分子的载体，而且这些功能分子的释放是可控的。因此，提供一种灵敏度高、特异性好的基于脂质体包埋电活性分子的电化学免疫检测方法用来检测胃泌素前体释放肽(ProGRP)，对小细胞肺癌(SCLC)的早期诊断、病情监测、判断预后及其制定合理的治疗方案和评估疗效具有重要意义。

发明内容